Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
מספר חתול: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) היא ערכת PCR כמותית המבוססת על RNA כתבנית.בתהליך הניסוי בוצעו שעתוק הפוך ו-PCR כמותי באותו צינור, מה שפשט את פעולת הניסוי והפחית את הסיכון לזיהום.בערכה זו, ה-cDNA של הגדיל הראשון סונתז ביעילות על-ידי עמיד בחום-Reverse Transcriptase והוגבר כמותית על-ידי HotStart Tag DNA Polymerase.הערכה מכילה בעיקר מאגר MP מותאם, תערובת אנזימים וכו'. תמיסת החוצץ כבר מכילה Mg2+ו-dNTP.בנוסף, מתווספים הגורמים שיכולים לעכב ביעילות את הגברה ה-PCR הלא ספציפית ולשפר את יעילות ההגברה של ריאקציות qPCR מרובות, מה שיכול להבטיח את יעילות ההגברה ולבצע עד תגובת הגברה מרובה.מערכת dUTP/UDG נוספה כדי למנוע ביעילות את הסיכון של זיהום אירוסול.
רכיבים
1. מאגר
2. מיקס אנזים
מִפרָט
| התחלה חמה | התחלה חמה מובנית |
| שיטת זיהוי | זיהוי פריימר-probe |
| שיטת PCR | שלב אחד RT-qPCR |
| פולימראז | Taq DNA פולימראז |
| סוג המדגם | DNA |
תנאי אחסון
המוצר נשלח עם קרח יבש וניתן לאחסן אותו ב-25~-15℃ למשך שנה.זה צריך להימנע לעתים קרובותהקפאה-הפשרה.מומלץ לשמור בנפרד.
הוראות
1.תְגוּבָה מערכת
| רכיבים | נפח (μL) | ריכוז סופי |
| מאגר 2 × MP | 12.5 | 1× |
| מיקס אנזים | 1 | - |
| תערובת פריימר/פרוב (2.5 מיקרומטר) | 3 | 0.3 מיקרומטר |
| תבנית RNA | 1-10 | - |
| H2O ללא RNase | עד 25 | - |
הערות:
הקפידו לערבב היטב לפני השימוש, הימנע מבועות מוגזמות הנגרמות מרטט עז.
א.ריכוז פריימר: תערובת פריימר כולל פריימר מולטיפלקס, בהתאם למצב ריכוז פריימר אופטימלי עשוי בין 0.l ל-1.0μM.
ב.ריכוז בדיקה: תערובת בדיקה כולל בדיקה מרובה תיוג הבדל קבוצת פלורסנט, בהתאם למצב ריכוז בדיקה אופטימלי עשוי בין 0.05 ל 0.5μM.
ג.דילול תבנית: qPCR הוא רגיש ביותר ומומלץ לדלל את התבנית.ערך בקרת Ct מתאים בין 20 ל-35.
ד.הכנת המערכת: נא להכין בשולחן העבודה הנקי במיוחד, ובפיפטור וצינור התגובה ללא שאריות נוקלאז;מומלץ להשתמש בראש האקדח עם אלמנט מסנן.הימנע מזיהום צולב וזיהום אירוסול.
2. אופטימיזציה לרכיבה על אופנייםנוהל
| מחזור שלב | טמפ' | זְמַן | מחזורים |
| תמלול הפוך | 50℃א | 20 דקות | 1 |
| דנטורציה ראשונית | 95℃ | 5 דקות | 1 |
| תגובת הגברה | 95℃ | 15 שניות |
40-45 |
| 60℃ b | 30 שניות c |
הערות:
א.תעתיק הפוך: הטמפרטורה יכולה לבחור 42°C או 50°C.
ב.תגובת הגברה: הטמפרטורה מותאמת לפי ערך ה-Tm של הפריימרים המעוצבים.
ג.רכישת אותות פלואורסצנטי: נא להגדיר את הליך הניסוי בהתאם לדרישות של מדריך המכשיר.
הערות
נא ללבוש את הציוד הנחוץ, כגון מעיל מעבדה וכפפות, כדי להבטיח את בריאותך ובטיחותך.
