2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)

מספר חתול: HCB5151A

SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) נועד לבצע PCR ישירות מדגימות ללא מיצוי DNA או הכנת דגימות.מגיב זה מורכב מ-DNA פולימראז עם התחלה חמה, אורציל DNA גליקוזילאז (UNG), מעכב RNase, MgCl₂, dNTPs (עם dUTP במקום dTTP), ומייצבים, עבור PCR כמותי (qPCR).מגיב זה יוצר סובלנות גבוהה למעכבים, ולכן ניתן ליישם אותו ישירות לזיהוי של דגימות כמו משטח גרון, רוק, דם מלא נגד קרישה, פלזמה וסרום ללא מיצוי DNA.המגיב משתמש במאגר קנייני עבור qPCR עם אנזימים מעורבים של פולימראז DNA אנטי-מעכב ואנזים UNG.לכן, הוא יכול להשיג הגברה טובה של גני מטרה בדגימות המכילות מעכבים ולעכב הגברה חיובית כוזבת הנגרמת על ידי זיהום שיורי PCR וזיהום אירוסול.מגיב זה תואם לרוב מכשירי ה-PCR הכמותיים הפלואורסצנטיים, כגון Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche וכן הלאה.

רכיבים

1. 50×SensiDirect אנזים/UNG Mix

2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)

תנאי אחסון

יש לשמור את כל הרכיבים ב-20℃ לאחסון לטווח ארוך ו-4℃ עד 3 חודשים.נא לערבב ביסודיות לאחר ההפשרה ולצנטריפוגה לפני השימוש.הימנע מהקפאה-הפשרה תכופה.

פרוטוקול רכיבה על אופניים

הוראות לפיפטה

1. הריכוז הסופי של הפריימר הוא בדרך כלל 0.2μM.לתוצאות טובות יותר, ניתן לייעל את ריכוז הפריימר בטווח של 0.2-1μM.

2. באופן כללי, ניתן לייעל את ריכוז הבדיקה בטווח של 0.1-0.3μM.הריכוז האופטימלי של הבדיקה קשור למכשיר ההגברה של PCR בזמן אמת, סוג הבדיקה וסוג החומר הניאון.אנא עיין במדריך המכשיר או בדרישות הספציפיות של כל בדיקה פלורסנטית.

3. סוגים שונים של דגימות מכילים סוגים ותוכן שונים של מעכב ומספר העתק של גן המטרה.יש לשקול את נפח הדגימה לפי המצב בפועל.בצע דילול של הדגימה על ידי הוספת מים נטולי נוקלאז או מאגר TE, במידת הצורך.

4. נפח מומלץ של דוגמאות שונות:

בקרת איכות

1. זיהוי פונקציות: רגישות, ספציפיות וחזרה של qPCR.

2. ללא פעילות נוקלאז אקסוגנית: ללא זיהום אנדונוקלאז אקסוגני ואקסונוקלאז.

הערות למוצר

1. מוצר זה משתמש בסוג חדשני של פולימראז DNA עם התחלה חמה, שניתן להפעיל תוך 1-5 דקות. מאחר שחוצץ התגובה שלו עבר אופטימיזציה, הוא מתאים יותר ל-PCR כמותי עם קרינה כפולה או מרובה בשיטת בדיקה.

2. אם ערך ה-Rn של הגברה PCR נמוך מדי או שההגברה מעוכבת כמובן, הפחתת כמות הדגימה, הגדלת נפח התגובה או דילול קודם של הדגימה עשויה לשפר את התוצאות.

3. איסוף דם, רוק, שתן, משטח גרון וכו' צריך לעמוד בדרישות הקריטריונים הקליניים, וניתן להשתמש בדגימה טרייה כדי למנוע פירוק חומצת גרעין.

4. מאחר שלאמפליקונים שונים יש יעילות ניצול שונה ל-dUTP ורגישות ל-UNG, יש לבצע אופטימיזציה של הריאגנטים אם רגישות הזיהוי יורדת בעת שימוש במערכת UNG.אנא צור איתנו קשר לקבלת תמיכה טכנית במידת הצורך.

5. כדי למנוע הגברה של תוצרי PCR העברה בין תגובות חד-שלביות, נדרשים אזור ניסוי ייעודי ופיפטה להגברה.הפעל עם כפפות והחלף לעתים קרובות ואל תפתח את צינור התגובה לאחר הגברה של PCR.