ערכת גנוטייפ עכבר

מספר חתול: HCR2021A

מוצר זה הוא ערכה המיועדת לזיהוי מהיר של גנוטיפים של עכברים, כולל מיצוי גולמי של DNA ומערכת הגברה PCR.ניתן להשתמש במוצר להגברת PCR ישירות מזנב עכבר, אוזן, אצבע ורקמות אחרות לאחר מחשוף פשוט על ידי Lysis Buffer ו-Proteinase k.ללא עיכול בן לילה, מיצוי פנול-כלורופורם או טיהור עמודים, דבר פשוט ומקצר את זמן הניסויים.המוצר מתאים להגברה של שברי מטרה עד 2kb ותגובות PCR מרובות עם עד 3 זוגות פריימרים.תערובת רקמות ישיר של 2×Mouse PCR מכילה פולימראז DNA מהונדס גנטית, Mg²⁺, dNTPs ומערכת חיץ אופטימלית כדי לספק יעילות הגברה גבוהה וסבילות מעכבים, כך שניתן לבצע תגובות PCR על ידי הוספת תבנית ופריימרים והזנת המוצר ל-1×.למוצר ה-PCR המוגבר עם מוצר זה יש בסיס "A" בולט בקצה 3' וניתן להשתמש בו ישירות עבור שיבוט TA לאחר טיהור.

רכיבים

תנאי אחסון

יש לאחסן מוצרים ב-25~-15℃ למשך שנתיים.לאחר ההפשרה, ניתן לאחסן את מאגר הליסיס בטמפרטורה של 2~8℃ לשימוש מרובה לטווח קצר, ולערבב היטב בעת השימוש.

יישום

מוצר זה מתאים לניתוח נוק-אאוט של עכברים, זיהוי טרנסגני, גנוטיפ וכן הלאה.

מאפיינים

1.פעולה פשוטה: אין צורך לחלץ DNA גנומי;

2.יישום רחב: מתאים להגברה ישירה של רקמות עכבר שונות.

הוראות

1.שחרור של DNA גנומי

1) הכנת lysate

ליזט רקמות מוכן לפי מספר דגימות העכברים שיש לבצע ליטוש (יש להכין ליזט רקמות במקום לפי המינון ולערבב היטב לשימוש), ושיעור הריאגנטים הנדרש לדגימה בודדת הוא כדלקמן:

2) הכנת דגימה וליזה

שימוש ברקמות מומלץ

קח כמות מתאימה של דגימות רקמה של עכבר בשפופרות צנטריפוגות נקיות, הוסף 200μL של ליזאט רקמה טרי לכל צינור צנטריפוגה, מערבב ונער, לאחר מכן דגירה בטמפרטורה של 55 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות, ולאחר מכן חום בטמפרטורה של 98 מעלות למשך 3 דקות.

3) צנטריפוגה

נער את הליסאט היטב וצנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך 5 דקות.ניתן להשתמש בסופרנטנט כתבנית להגברת PCR.אם התבנית נחוצה לאחסון, העבירו את הסופרנטנט לצינור צנטריפוגה סטרילי אחר ואחסנו ב-20 מעלות צלזיוס למשך שבועיים.

2.הגברה של PCR

הסר את 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix מ-20℃ והפשר על קרח, ערבב הפוך והכין את מערכת התגובה PCR לפי הטבלה הבאה (פעל על קרח):

הערה:

א) הכמות הנוספת לא תעלה על 1/10 מהמערכת, ואם מוסיפים יותר מדי, ייתכן שהגברת PCR תהיה מעוכבת.

תנאי PCR מומלצים

הערה:

א) טמפרטורת חישול: בהתייחס לערך Tm של הפריימר, מומלץ להגדיר את טמפרטורת החישול לערך Tm הקטן יותר של הפריימר +3~5℃.

בעיות ופתרונות נפוצים

1.אין רצועות ממוקדות

1) תוצר תמוגה מוגזם.בחר את הכמות המתאימה ביותר של תבנית, בדרך כלל לא יותר מ-1/10 מהמערכת;

2) גודל מדגם גדול מדי.לדלל את lysate 10 פעמים ולאחר מכן להגביר, או להפחית את גודל המדגם וליזה מחדש;

3) דגימות רקמות אינן טריות.מומלץ להשתמש בדגימות רקמה טריות;

4) איכות פריימר ירודה.השתמש ב-DNA גנומי להגברה כדי לאמת את איכות הפריימר ולייעל את עיצוב הפריימר.

2.הגברה לא ספציפית

1) טמפרטורת החישול נמוכה מדי ומספר המחזור גבוה מדי.הגדל את טמפרטורת החישול והפחת את מספר המחזורים;

2) ריכוז התבנית גבוה מדי.הפחת את כמות התבנית או דלל את התבנית 10 פעמים לאחר ההגברה;

3) סגוליות פריימר ירודה.ייעל את עיצוב הפריימר.

הערות

1.על מנת למנוע זיהום צולב בין דגימות, יש להכין כלי דגימה מרובים, וניתן לנקות את פני הכלים עם תמיסת נתרן היפוכלוריט 2% או מנקה חומצת גרעין לאחר כל דגימה אם נדרש שימוש חוזר.

2.מומלץ להשתמש ברקמות עכבר טריות, ונפח הדגימה לא צריך להיות גדול מדי כדי למנוע השפעה על תוצאות ההגברה.

3.מאגר ליסיס צריך להימנע מהקפאה-הפשרה תכופה, וניתן לאחסן אותו בטמפרטורה של 2~8℃ לשימוש מרובה לטווח קצר.אם מאוחסנים בטמפרטורה נמוכה, עלולים להיווצר משקעים, ויש להמיס אותם במלואו לפני השימוש.

4.PCR Mix צריך להימנע מהקפאה-הפשרה תכופה, וניתן לאחסן אותו בטמפרטורה של 4℃ לשימוש חוזר לטווח קצר.

5.מוצר זה מיועד רק למחקר ניסיוני מדעי ואין להשתמש בו באבחון או טיפול קליני.