Robustart Taq DNA Polymerase

Robustart Taq DNA Polymerase הוא פולימראז של DNA להתחלה חמה.מוצר זה לא רק יכול לעכב טוב יותר את התגובה הלא ספציפית הנגרמת על ידי חישול לא ספציפי של פריימרים או צבירת פריימר בתהליך ההכנה וההגברה של מערכת PCR.לכן, יש לו סגוליות מעולה והוא יעיל יותר להגברה של תבניות בריכוז נמוך, והוא מתאים לתגובת הגברה PCR מרובה.יתרה מכך, למוצר זה יש יישום טוב מאוד, וניתן להשיג תוצאות הגברה יציבות בסוגים שונים של תגובות PCR.

רכיבים

1.5 U/μL Robustart Taq DNA פולימראז

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ ללא תשלום) (אופציונלי)

3.25 mM MgCl₂(אופציונאלי)

* 10 × PCR Buffer II (ללא Mg²+) אינו מכיל dNTP ו-Mg²+, נא הוסף dNTPs ו-MgCl₂בעת הכנת מערכת התגובה.

יישומים מומלצים

1.הגברה מהירה.

2.הגברה מרובה.

3.הגברה ישירה של דם, ספוגיות ודגימות אחרות.

4.איתור מחלות בדרכי הנשימה.

מצב אחסון

-20 מעלות צלזיוס לאחסון לטווח ארוך, יש לערבב היטב לפני השימוש, להימנע מהקפאה-הפשרה תכופה.

*אם מתרחשים משקעים לאחר קירור, זה נורמלי;מומלץ להתאזן לטמפרטורת החדר לפני הערבוב והשימוש.

הגדרת יחידה

יחידה פעילה אחת (U) מוגדרת ככמות האנזים המשלבת 10 ננומול של deoxyribonucleotide בחומר בלתי מסיס בחומצה ב-74°C למשך 30 דקות תוך שימוש ב-DNA מופעל של זרע סלמון כתבנית/פריימר.

בקרת איכות

1.טוהר אלקטרופורטי SDS-PAGE גדול מ-98%.

2.רגישות הגברה, בקרת אצווה לאצווה, יציבות.

3.ללא פעילות נוקלאז אקסוגנית, ללא אנדונוקלאז או זיהום אקסוגני

הוראות

הגדרת תגובה

הערות:

1) א.המאגר אינו מכיל dNTP ו-Mg²+, אנא הוסף dNTPs ו-MgCl₂בעת הכנת מערכת התגובה.

2) ב.אם משתמשים ב-qPCR/qRT-PCR, יש להוסיף בדיקות פלורסנט למערכת התגובה.בדרך כלל, ריכוז פריימר סופי של 0.2 מיקרומטר ייתן תוצאות טובות;אם ביצועי התגובה גרועים, ניתן להתאים את ריכוז הפריימר בטווח של 0.2-1 מיקרומטר.ריכוז הבדיקה מותאם בדרך כלל בטווח של 0.1-0.3 מיקרומטר.ניתן לבצע ניסויי שיפוע ריכוז כדי למצוא את השילוב הטוב ביותר של פריימר ובדיקה.

פרוטוקול רכיבה תרמית

הערות

1.קצב ההגברה של פולימראז DNA מהיר לא צריך להיות פחות מ-1 kb/10 שניות.קצב העלייה והירידה בטמפרטורה, מצב בקרת הטמפרטורה ויעילות הולכת החום של מכשירי PCR שונים משתנים מאוד, לכן מומלץ לייעל את תנאי התגובה האופטימליים עבור מכשיר ה-PCR המהיר הספציפי.

2.המערכת ניתנת להתאמה גבוהה, עם סגוליות ורגישות גבוהות יותר.

3.מתאים לשימוש כריאגנטים לזיהוי PCR ברגישות גבוהה, וניתן להשתמש בהם בתגובות הגברה של PCR מרובות.

4.5′→3′ פעילות פולימראז, 5′→3′ פעילות אקסונוקלאז;אין פעילות 3′→5′ exonuclease;אין פונקציית הגהה.

5.מתאים לבדיקה איכותית וכמותית של PCR ו-RT-PCR.

6.קצה 3′ של תוצר ה-PCR הוא A, אותו ניתן לשבט ישירות לתוך וקטור T.

7.שיטת שלושת השלבים מומלצת לפריימרים עם טמפרטורות חישול נמוכות או להגברה של קטעים מעל 200 bp.