אוניברסלי SYBR GREEN qPCR Premix (כחול)

מספר חתול: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Based Dye) הוא פתרון מראש להגברת PCR כמותית 2× בזמן אמת המאופיינת ברגישות ובספציפיות גבוהות, בצבע כחול, ויש לו השפעה של מעקב אחר הוספת דגימות.רכיב הליבה Taq DNA polymerase משתמש בהתחלה חמה של נוגדנים כדי לעכב ביעילות הגברה לא ספציפית עקב חישול פריימר במהלך הכנת הדגימה.במקביל, הנוסחה מוסיפה את הגורמים המקדמים כדי לשפר את יעילות ההגברה של תגובת PCR ולהשוות את ההגברה של גנים בעלי תכולת GC שונה (30 ~ 70%), כך ש-PCR כמותי יכול להשיג קשר ליניארי טוב בכמות כמותית רחבה אזור.מוצר זה מכיל ROX Passive Reference Dye מיוחד, אשר ישים לרוב מכשירי ה-qPCR.אין צורך להתאים את הריכוז של ROX במכשירים שונים.יש צורך רק להוסיף פריימרים ותבניות כדי להכין את מערכת התגובה להגברה.

רכיבים

Universal Blue qPCR Master Mix

תנאי אחסון

המוצר נשלח עם שקיות קרח וניתן לאחסן אותו ב-25℃~-15℃ למשך 18 חודשים.יש צורך להימנע מקרינת אור חזקה בעת אחסון או הכנת מערכת התגובה.

מִפרָט

הוראות

1. מערכת תגובה

[הערה]: מערבבים היטב לפני השימוש כדי למנוע בועות מוגזמות מטלטול נמרץ.

א) ריכוז פריימר: ריכוז הפריימר הסופי הוא 0.2μmol/L, וניתן גם לכוון אותו בין 0.1 ל-1.0μmol/L בהתאם.

ב) ריכוז תבנית: אם התבנית היא תמיסת מניות cDNA לא מדוללת, הנפח המשמש לא יעלה על 1/10 מהנפח הכולל של תגובת qPCR.

ג) דילול תבנית: מומלץ לדלל את תמיסת ה-cDNA ב-5-10 פעמים.הכמות האופטימלית של תבנית הנוספת טובה יותר כאשר ערך ה-Ct המתקבל בהגברה הוא 20-30 מחזורים.

ד) מערכת תגובה: מומלץ להשתמש ב-20μL או 50μL כדי להבטיח את היעילות והחזרה של הגברה של גן המטרה.

ה) הכנת המערכת: נא להתכונן בספסל הסופר נקי ולהשתמש בקצות ובצינורות התגובה ללא שאריות נוקלאז;מומלץ להשתמש בטיפים עם מחסניות סינון.הימנע מזיהום צולב וזיהום אירוסול.

2.תוכנית תגובה

תוכנית רגילה

תוכנית מהירה

[הערה]: התוכנית המהירה מתאימה לרוב המוחלט של הגנים, וניתן לנסות תוכניות סטנדרטיות עבור גנים מורכבים של מבנה משני בודד.

א) טמפרטורת וזמן חישול: נא להתאים לפי אורך הפריימר וגן היעד.

ב) רכישת אותות פלואורסצנטי (★): נא להגדיר את הליך הניסוי בהתאם לדרישות בהוראות השימוש במכשיר.

ג) עקומת התכה: ניתן להשתמש בתוכנית ברירת המחדל של המכשיר כרגיל.

3. ניתוח תוצאות 

נדרשו מינימום של שלושה שכפולים ביולוגיים לניסויים כמותיים.לאחר התגובה, יש לאשר את עקומת ההגברה ועקומת ההיתוך.

3.1 עקומת הגברה:

עקומת ההגברה הסטנדרטית היא בצורת S.ניתוח כמותי הוא המדויק ביותר כאשר ערך ה-Ct נופל בין 20 ל-30. אם ערך ה-Ct נמוך מ-10, יש צורך לדלל את התבנית ולבצע את הבדיקה שוב.כאשר ערך Ct הוא בין 30-35, יש צורך להגדיל את ריכוז התבנית או את נפח מערכת התגובה, כדי לשפר את יעילות ההגברה ולהבטיח את הדיוק של ניתוח התוצאות.כאשר ערך Ct גדול מ-35, תוצאות הבדיקה אינן יכולות לנתח כמותית את הביטוי של הגן, אלא ניתן להשתמש בהן לניתוח איכותי.

3.2 עקומת התכה:

השיא הבודד של עקומת ההיתוך מצביע על כך שסגוליות התגובה טובה וניתן לבצע ניתוח כמותי;אם עקומת ההיתוך מציגה פסגות כפולות או מרובות, לא ניתן לבצע ניתוח כמותי.עקומת ההיתוך מציגה פסגות כפולות, ויש צורך לשפוט אם השיא הלא-יעד הוא דימר פריימר או הגברה לא ספציפית על ידי אלקטרופורזה של DNA agarose gel.אם מדובר בדימר פריימר, מומלץ להפחית את ריכוז הפריימר או לעצב מחדש פריימרים ביעילות הגברה גבוהה.אם מדובר בהגברה לא ספציפית, נא להגדיל את טמפרטורת החישול, או לעצב מחדש את הפריימרים עם ספציפיות.

הערות

נא ללבוש את ה-PPE הדרוש, כגון מעיל מעבדה וכפפות, כדי להבטיח את בריאותך ובטיחותך!

מוצר זה מיועד לשימוש מחקר בלבד!