אנזימים UDG/UNG
UDG(uracil DNA glycosylase) יכול לזרז את ההידרוליזה של הקישור N-glycosidic בין בסיס uracil לבין עמוד השדרה של סוכר-פוספט ב-ssDNA ו-dsDNA.הוא יכול לשלוט בקלות על זיהום אירוסול ומתאים למערכות ביולוגיה מולקולרית נפוצות כגון PCR, qPCR, RT-qPCR ו-LAMP.
מפרטים
| מארח ביטוי | רקומביננטי E. coliwith uracil DNA glycosylase גן |
| משקל מולקולרי | 24. 8kDa |
| טוֹהַר | ≥95% (SDS-PAGE) |
| השבתת חום | 95℃, 5~10 דקות |
| הגדרת יחידה | יחידה אחת (U) מוגדרת ככמות האנזים הדרושה כדי לזרז את ההידרוליזה של 1 מיקרוגרם dsDNA המכיל dU תוך 30 דקות בטמפרטורה של 25℃. |
אִחסוּן
יש לאחסן את המוצר ב-25℃~-15°C למשך שנתיים.
הוראות
1.הכנת תערובת תגובת PCR לפי המערכת הבאה
| רכיבים | נפח (μL) | ריכוז סופי |
| מאגר 10×PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 ממול/ליטר |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 ממול/ליטר |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10 mmol/leach) | 1 | 0.2 ממול/שטיפה |
| תבנית DNA | X | - |
| פריימר1 (10 מיקרומול/ליטר) | 2 | 0.4 מיקרומול/ליטר |
| פריימר 2 (10 מיקרומול/ליטר) | 2 | 0.4 מיקרומול/ליטר |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | עד 50 | - |
הערה: בהתאם לדרישות הניסוי, ניתן להתאים את הריכוז הסופי של dUTP בין 0.2-0.6 mmol/L, וניתן להוסיף 0.2 mmol/L dTTP באופן סלקטיבי.
2.הליך הגברה
| שלב מחזור | טֶמפֶּרָטוּרָה | זְמַן | מחזורים |
| השפלת תבנית המכילה dU | 25℃ | 10 דקות | 1 |
| הפעלת UDG, דנטורציה ראשונית של תבנית | 95℃ | 5 ~ 10 דקות | 1 |
| דנטורציה | 95℃ | 10 שניות |
30-35 |
| רִכּוּך | 60℃ | 20 שניות | |
| סיומת | 72℃ | 30 שניות/ק"ב | |
| הארכה סופית | 72℃ | 5 דקות | 1 |
הערה: ניתן לכוונן את זמן התגובה ב-25 מעלות תוך 5-10 דקות בהתאם לדרישות הניסוי.
הערות
1.UDG פעיל ברוב מאגרי התגובה של PCR.
2.יש לאחסן אנזימים בקופסת קרח או על אמבט קרח בעת השימוש, ויש לאחסן אותם ב-20 מעלות צלזיוס מיד לאחר השימוש.
3.נא ללבוש את הציוד הנחוץ, מעיל מעבדה וכפפות, כדי להבטיח את בריאותך ובטיחותך!
