מעכב רנאס (ללא גליצרול)
Inhibitor Murine RNase הוא מעכב RNase של עכברים רקומביננטי המתבטא ומטוהר מ-E.coli.הוא נקשר ל-RNase A, B או C ביחס של 1:1 באמצעות קשר לא קוולנטי, ובכך מעכב את פעילות שלושת האנזימים ומגן על RNA מפני פירוק.עם זאת, זה לא יעיל נגד RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H או RNase מאספרגילוס.מעכב RNase Murine נבדק על ידי RT-PCR, RT-qPCR ו-IVT mRNA, והיה תואם למגוון מסחרי של Reverse transcriptases, DNA פולימראזות ו-RNA פולימראזות.
בהשוואה למעכבי RNase אנושיים, מעכב RNase של עכברים אינו מכיל שני ציסטינים הרגישים מאוד לחמצון הגורם לחוסר הפעלה של המעכב.זה מה שהופך אותו ליציב בריכוזים נמוכים של DTT (פחות מ-1 מ"מ).תכונה זו הופכת אותו למתאים לשימוש בתגובות שבהן ריכוזים גבוהים של DTT פוגעים בתגובה (למשל RT-PCR בזמן אמת).
Aיישום
ניתן להשתמש במוצר זה באופן נרחב בכל ניסוי שבו התערבות RNase אפשרית כדי למנוע פירוק RNA, כגון:
1. סינתזת cDNA של גדיל ראשון, RT-PCR, RT-qPCR וכו';
2. הגן על RNA מפני פירוק בתעתיק/תרגום חוץ-גופית (למשל שכפול ויראלי במבחנה);
3. עיכוב פעילות RNase במהלך בידוד וטיהור RNA.
תנאי אחסון
אחסן ב-25~-15℃;
מחזורי הקפאה-הפשרה ≤ 5 פעמים;
תקף למשך שנה.
הגדרת יחידה
יחידה אחת מוגדרת ככמות מעכבי RNase הנדרשת כדי לעכב את הפעילות של 5 ng של RNase A ב-50%.
משקל מולקולרי
מעכב RNase (ללא גליצרול) הוא חלבון של 50 kDa.
בקרת איכות
Exonuclease פעילות:
דגירה של 40 U של אנזים עם 1 מיקרוגרם λ-Hind III עיכול DNA למשך 16 שעות ב-37 מעלות צלזיוס לא הביאה לפירוק בלתי ניתן לזיהוי של ה-DNA כפי שנקבע על ידי אלקטרופורזה ג'ל.
פעילות אנדונוקלאז:
דגירה של 40 U של אנזים עם 1 מיקרוגרם λ DNA במשך 16 שעות ב-37 מעלות צלזיוס הובילה ללא השפלה ניתנת לזיהוי של ה-DNA כפי שנקבע על ידי אלקטרופורזה ג'ל.
ניקינג פעילות:
דגירה של 40 U של אנזים עם 1 מיקרוגרם pBR322 במשך 16 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות לא הביאה לפירוק בלתי ניתן לזיהוי של ה-DNA כפי שנקבע על ידי אלקטרופורזה ג'ל.
RNase פעילות:
דגירה של 40 U של אנזים עם 1.6 מיקרוגרם MS2 RNA למשך 4 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות לא הביאה לפירוק בלתי ניתן לזיהוי של ה-RNA כפי שנקבע על ידי אלקטרופורזה של ג'ל.
E.coli DNA:
40 U של אנזים מזוהה על ידי TaqMan qPCR.ה-DNA E.coli הוא ≤ 0. 1pg/40U.
Nהערהs
1. אין לנער או לערבב באלימות כדי למנוע נטרול אנזימים.
2. מעכב RNase פעיל בטמפרטורות הנעות בין 25 ℃ ל 55 ℃ והוא מושבת ב ≥ 65 ℃.
3. הפעילות של RNase H, RNase 1 ו-RNase T1 אינה מעוכבת.
4. טווח ה-pH לעיכוב פעילות RNase הוא רחב (פעיל ב-pH 5-9), ומציג פעילות מקסימלית ב-pH 7-8.
