Wild Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase הוא פולימראז DNA יציב תרמי מבית Thermus aquaticus YT-1, בעל פעילות פולימראז של 5′→3′ ופעילות אנדונוקלאז של 5'.
רכיבים
| רְכִיב | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× מאגר טאק | 2×1 מ"ל | 2×10 מ"ל | 2×50 מ"ל | 5×200 מ"ל |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 מ"ל | 1 מ"ל | 5 מ"ל | 5×10 מ"ל |
מצב אחסון
הובלה מתחת ל-0°C ולאחסן ב-25°C~-15°C.
הגדרת יחידה
יחידה אחת מוגדרת ככמות האנזים המשלבת 15 ננומול של dNTP בחומר בלתי מסיס בחומצה תוך 30 דקות ב-75 מעלות צלזיוס.
בקרת איכות
1.מבחן טוהר חלבון (SDS-PAGE):הטוהר של Taq DNA פולימראז היה ≥95% נקבע על ידי ניתוח SDS-PAGE.
2.Endפעילות onuclease:מינימום של 5 U של Taq DNA פולימראז עם 1 מיקרוגרם λDNA למשך 16 שעות ב-37 ℃ גורם לפירוק לא ניתן לזיהוי כפי שנקבע.
3.פעילות Exonuclease:מינימום של 5 יחידות של Taq DNA פולימראז עם 1 מיקרוגרם λ -Hind Ⅲ DNA עיכול למשך 16 שעות ב-37 ℃ גורם לפירוק לא ניתן לזיהוי כפי שנקבע.
4.פעילות ניקאזה:מינימום של 5 U של Taq DNA פולימראז עם 1 מיקרוגרם pBR322 DNA למשך 16 שעות ב-37 מעלות צלזיוס גורם לפירוק לא ניתן לזיהוי כפי שנקבע.
5.פעילות RNase:מינימום של 5 U של Taq DNA פולימראז עם 1.6 מיקרוגרם MS2 RNA למשך 16 שעות ב-37 מעלות צלזיוס גורם לפירוק לא ניתן לזיהוי כפי שנקבע.
6.אי - קוליDNA:5 U של פולימראז של Taq DNA נבדק עבור נוכחות של DNA גנומי מסוג E. coli באמצעות TaqMan qPCR עם פריימרים ספציפיים ל-E. coli 16S rRNA לוקוס.זיהום ה-DNA הגנומי של E. coli הוא ≤1 עותק.
7.הגברה של PCR (5.0 kb למבדה DNA)- תגובה של 50 µL המכילה 5 ng Lambda DNA עם 5 יחידות של Taq DNA Polymerase למשך 25 מחזורים של הגברה של PCR מביאה לתוצר הצפוי של 5.0 kb.
הגדרת תגובה
| רכיבים | כרך |
| תבנית DNAa | אופציונאלי |
| פריימר קדימה 10 מיקרומטר | 1 μL |
| פריימר הפוך 10 מיקרומטר | 1 μL |
| מיקס dNTP (10 מ"מ כל אחד) | 1 μL |
| מאגר 10×Taq | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseב | 0.25 μL |
| מים ללא נוקלאז | עד 50 μL |
הערות:
1) ריכוז התגובה האופטימלי של תבניות שונות שונה.הטבלה הבאה מציגה את השימוש המומלץ בתבנית של מערכת תגובה של 50 µL.
| DNA | כמות |
| גנומי | 1 ng-1 מיקרוגרם |
| פלסמיד או ויראלי | 1 pg-1 ng |
2) הריכוז האופטימלי של Taq DNA Polymerase עשוי לנוע בין 0.25 µL~1 µL ביישומים מיוחדים.
תְגוּבָהתכנית
| שלב | טֶמפֶּרָטוּרָה(מעלות צלזיוס) | זְמַן | מחזורים |
| דנטורציה ראשוניתa | 95 ℃ | 5 דקות | - |
| דנטורציה | 95 ℃ | 15-30 שניות | 30-35 מחזורים |
| רִכּוּךב | 60 ℃ | 15 שניות | |
| סיומת | 72 ℃ | 1kb/min | |
| הרחבה סופית | 72 ℃ | 5 דקות | - |
הערות:
1) מצב הדנטורציה הראשוני מתאים לרוב תגובות ההגברה וניתן לשנותו בהתאם למורכבות מבנה התבנית.אם מבנה התבנית מורכב, ניתן להאריך את זמן הטרום-דנטורציה ל-5 - 10 דקות כדי לשפר את אפקט הדנטורציה הראשוני.
2) יש להתאים את טמפרטורת החישול בהתאם לערך ה-Tm של הפריימר, המוגדר בדרך כלל ל-3 ~ 5 ℃ נמוך מערך ה-Tm של הפריימר;עבור תבניות מורכבות, יש צורך להתאים את טמפרטורת החישול ולהאריך את זמן הארכה כדי להשיג הגברה יעילה.
