Superstart qPCR Premix plus-UNG
מספר חתול: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG הוא מגיב מיוחד המיועד לתגובות PCR איכותיות וכמותיות בזמן אמת באמצעות זיהוי מבוסס בדיקה, שפותח במיוחד עבור תהליכי ליאופיליזציה.הוא מכיל אנזים חדש להתחלה חמה Hotstart Taq plus (DG), שפעילות האנזים Taq שלו אטומה בטמפרטורת החדר, ובכך מעכבת הגברה לא ספציפית הנגרמת על ידי חישול לא ספציפי של פריימר או יצירת דימר פריימר בתנאי טמפרטורה נמוכה, ובכך משפרת הספציפיות של תגובת ההגברה.מגיב זה משתמש במאגר ספציפי ל-qPCR אופטימלי ובמערכת נגד זיהום UNG/dUTP כדי להשיג התנעה חמה מהירה, מה שמשפר מאוד את היעילות והרגישות של תגובות qPCR.זה יכול להשיג עקומות סטנדרטיות טובות במגוון רחב של אזורי כימות ולבצע כמות מדויקת, ולמנוע ביעילות הגברה חיובית שגויה הנגרמת על ידי שאריות של מוצרי PCR או זיהום אירוסול.מגיב זה תואם לרוב מכשירי ה-PCR הכמותיים הפלואורסצנטיים מיצרנים כגון Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ו-Roche וכו', ומפגין יציבות טובה בצורת ליופיליזציה.
הרכב מגיב
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+חינם) (DG)
2. 250 מ"מ MgCl2
3. 4×מגן מפני חום (אופציונלי)
תנאי אחסון
אחסון לטווח ארוך ב-20℃;ניתן לאחסן בטמפרטורה של 4℃ עד 3 חודשים.מערבבים היטב לפני השימוש והימנעו מהקפאה והפשרה חוזרות ונשנות.
פרוטוקול רכיבה על אופניים
| תהליך | טמפ' | זְמַן | מחזור |
| אִכּוּל | 50℃ | 2 דקות | 1 |
| הפעלת פולימראז | 95℃ | 1~5 דקות | 1 |
| לְפַגֵל | 95℃ | 10~20 שניות | 40-50 |
| חישול והרחבה | 56~64℃ | 20~60 שניות | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Syהכנת גזע
|
הרכב |
נפח 25µL |
נפח 50µL |
ריכוז סופי |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(מג2+חינם) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 מ"מ |
| 4×מגן מפני חום1 | 6.25 µL | 12.5 µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| תבנית DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | עד 25µL | עד 50 µL | —— |
1. ריכוז סופי של 0.2μM עבור פריימרים בדרך כלל מניב תוצאות טובות;כאשר ביצועי התגובה גרועים, התאם את ריכוז הפריימר בטווח של 0.2-1μM לפי הצורך.ריכוז הבדיקה מותאם בדרך כלל בטווח של 0.1-0.3μM באמצעות ניסויי שיפוע כדי למצוא שילובים אופטימליים.
2. מספר ההעתקים של גני המטרה הכלולים בסוגים שונים של תבניות משתנה;במידת הצורך, ניתן לבצע דילול גרדיאנט כדי לקבוע את כמות הוספת התבנית האופטימלית.
3. מערכת זו ניתנת לליאופיליזציה;כאשר לקוחות משתמשים במערכת זו ללא דרישות ייבוש בהקפאה, ניתן להוסיף סלקטיבית 4xlyoprotectant; אם יש צורך במוצרים מיובשים בהקפאה,במהלך אימות ביצועי המוצר בשלב ריאגנטים נוזליים, עליו להוסיף 4xlyoprotectant כדי להבטיח עקביות עם רכיבי המערכת הליופילית. ואפקטים.
כאשר המערכת בשימושד לייבוש בהקפאה, הכינו את מערכת as הבא:
| הרכב | 25µL מערכת תגובה |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+חינם) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4×מגן מפני חום | 6.25 µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | עד 18~20µL |
* אם יש צורך במערכות אחרות לייבוש בהקפאה, נא להתייעץ בנפרד.
תהליך ליאופיליזציהss
| תהליך | טמפ' | זְמַן | מַצָב | לַחַץ |
| הקפאה מוקדמת | 4℃ | 30 דק | לְהַחזִיק |
1 כספומט |
| -50℃ | 60 דקות | הִתקָרְרוּת | ||
| -50℃ | 180 דקות | לְהַחזִיק | ||
| ייבוש ראשוני | -30℃ | 60 דקות | הַסָקָה |
ואקום אולטימטיבי |
| -30℃ | 70 דקות | לְהַחזִיק | ||
| ייבוש משני | 25℃ | 60 דקות | הַסָקָה |
ואקום אולטימטיבי |
| 25℃ | 300 דקות | לְהַחזִיק |
2. תהליך הליאופיליזציה לעיל הוא לעיון בלבד.לסוגי מוצרים שונים ולמייבשי הקפאה שונים יש פרמטרים שונים, כך שניתן לבצע התאמות בהתאם בפועלתנאים במהלך השימוש.
3. תהליכי ליאופיליזציה שונים עשויים להתאים לגדלי אצווה שונים של ליופיליזציהמוצרים, ולכן יש לבצע אימות מספיק של בדיקות כאשר משתמשים בהם לייצור בקנה מידה גדול.
הוראות לשימוש בליקופיליזציהד אבקה
1. צנטריפוגה בקצרה את האבקה הליופיליזית;
2. הוסף תבנית חומצת גרעין לאבקה הליופילית והוסף מים עד 25µL;
3. מערבבים היטב בצנטריפוגה ומפעילים במכונה.
בקרת איכות:
1. בדיקה פונקציונלית: רגישות, סגוליות, שחזור של qPCR.
2. ללא פעילות נוקליאז אקסוגנית, ללא זיהום אנדו/אקסונוקלאז אקסוגני.
מידע טכני:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG משתמש באנזים התחלה חמה חדש המאפשר הפעלה חמה מהירה תוך 1~5 דקות;באמצעות ניסוח חיץ מיוחד הוא מתאים לתגובות PCR כמותיות פלואורסצנטיות.
2. יש לו סגוליות גבוהה יותר אשר משפר משמעותית את הרגישות של זיהוי גבול PCR כמותי הקרינה, מה שהופך את עקומות ההגברה לנורמליזציה, ערך הקרינה משיג שיפור ברור בתבניות ריכוז נמוך, מתאים כריאגנטים כמותיים לזיהוי PCR עם רגישות גבוהה.
3. עבור פריימרים עם טמפרטורת חישול נמוכה יותר או יותר מ-200bp שברים, מומלצת שיטה בת 3 שלבים.
4. יעילות הניצול של dUTP ורגישות לאנזים UNG שונים עבור גני מטרה שונים, ולכן אם שימוש במערכת UNG מוביל לירידה ברגישות הזיהוי, יש להתאים את מערכת התגובה ולמטב אותה.אם נדרשת תמיכה טכנית אנא צור קשר עם החברה שלנו.
5. השתמש באזורים ובפיפטות ייעודיים לפני ואחרי הגברה, ללבוש כפפות במהלך הפעולה ולהחליף אותן לעתים קרובות;אין לפתוח את צינור התגובה לאחר השלמת PCR כדי למזער זיהום של דגימות על ידי מוצרי PCR.
