רנס א
Ribonuclease A (RNaseA) הוא פוליפפטיד חד-גדילי המכיל 4 קשרי דיסולפיד במשקל מולקולרי של כ-13.7 kDa.RNase A הוא אנדוריבונוקלאז המפרק באופן ספציפי RNA חד-גדילי בשאריות C ו-U.באופן ספציפי, המחשוף מזהה את הקשר הפוספודיסטר הנוצר על ידי 5'-ריבוז של נוקלאוטיד וקבוצת הפוספט על 3'-ריבוז של נוקלאוטיד פירמידין הסמוך, כך שהפוספטים 2,3'-מחזוריים עוברים הידרוליזה ל-3 המקביל. "נוקלאוזיד פוספטים (למשל pG-pG-pC-pA-pG מבוקע על ידי RNase A ליצירת pG-pG-pCp ו-A-PG).RNase A הוא הפעיל ביותר בביקוע RNA חד-גדילי.ריכוז עבודה מומלץ הוא 1-100μG/mL, תואם למערכות תגובה שונות.ריכוז מלח נמוך (0-100 מ"מ NaCl) יכול לשמש לחיתוך RNA חד גדילי, RNA דו גדילי ושרשראות RNA הנוצרות על ידי הכלאה של RNA-DNA.עם זאת, בריכוז מלח גבוה (≥0.3 M), RNase A מבקע באופן ספציפי רק RNA חד-גדילי.
RNase A משמש לרוב להסרת RNA במהלך הכנת ה-DNA הפלסמיד או ה-DNA גנומי. האם DNase פעיל או לא במהלך תהליך ההכנה יכול להשפיע בקלות על התגובה.ניתן להשתמש בשיטה המסורתית של הרתחה באמבט מים כדי לבטל את פעילות ה-DNase.מוצר זה אינו מכיל DNase ופרוטאז, ואינו דורש טיפול בחום לפני השימוש.בנוסף, ניתן להשתמש במוצר זה גם בניסויים בביולוגיה מולקולרית כגון ניתוח הגנה על RNase וניתוח רצף RNA.
תנאי אחסון
ניתן לאחסן את המוצר ב-25 ~ 15℃, תקף לשנתיים.
הוראות
זוהי אחת השיטות הנפוצות להכנת פתרון אחסון RNase A.ניתן להכין אותו גם על ידישיטות אחרות על פי השיטות המסורתיות במעבדה או בספרות העיון (כגוןהמסה ישירה בתמיסת Tris-HCl 10 mM, pH 7.5 או Tris-NaCl)
1. השתמש ב-10 מ"מ נתרן אצטט (pH 5.2) כדי להכין 10 מ"ג/מ"ל של תמיסת אחסון RNase A
2. חימום ב-100 ℃ למשך 15 דקות
3. מצננים לטמפרטורת החדר, מוסיפים 1/10 נפח של 1 M Tris-HCl (pH 7.4), כוונן את ה-pH שלו ל-7.4 (עבורלדוגמה, הוסף 500 מ"ל של 10 גרם/מ"ל תמיסת אחסון RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. ארוז משנה ב-20℃ לאחסון קפוא, שיכול להיות יציב עד שנתיים.
[הערות]: כאשר מרתיחים תמיסת RNaseA בתנאים ניטרליים, יווצרו משקעי RNase;מרתיחים אותו ב-pH נמוך יותר, ואם יש משקעים, ניתן להבחין בהם, שעלולים להיגרם מנוכחות של זיהומי חלבון.אם נמצא משקעים לאחר רתיחה, ניתן להסיר זיהומים באמצעות צנטריפוגה במהירות גבוהה (13000 סל"ד), ולאחר מכן לארוז משנה לאחסון בהקפאה.
מידע על המוצר
| מילים נרדפות | Ribonuclease I;ריבונוקלאז הלבלב;ריבונוקלאז 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;רנס א;Endoribonulcease I |
| מס' CAS | 9001-99-4 |
| מראה חיצוני | אבקה לופילית לבנה |
| משקל מולקולרי | ~ 13.7kDa (רצף חומצות אמינו) |
| ערך חומציות | 7.6 (טווח פעילות 6-10) |
| טמפרטורה מתאימה | 60℃ (טווח פעילות 15-70℃) |
| סוכן מפעיל | Na2+.ק+ |
| מעכב | מעכב רנאס |
| שיטת השבתה | לא ניתן להשבית על ידי חימום, מומלץ להשתמש בעמודת צנטריפוגה |
| מָקוֹר | דְמוּי שׁוֹר |
| מְסִיסוּת | מסיס במים (10 מ"ג/מ"ל) |
| הפסד על יבש | ≤5.0% |
| פעילות אנזים | ≥60 יחידות קוניץ/מ"ג |
| נקודה איזואלקטרית | 9.6 |
הערות
למען בטיחותך ובריאותך, נא ללבוש מעילי מעבדה וכפפות חד פעמיות להפעלה.
