One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
מספר חתול: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix מיועד לכימות הקרינה על בסיס צבע SYBR Green I.שימוש בפריימרים ספציפיים לגנים, תגובות שעתוק לאחור ו-qPCR מושלמות בצינור אחד, מה שמבטל את הצורך בפעולות חוזרות של פתיחת מכסה ופפטציה, משפר מאוד את יעילות הבדיקה ומפחית את הסיכון לזיהום.עבור דגימות RNA, הערכה משתמשת ב-Reverse Transcriptase עמיד בחום לסינתזה יעילה של cDNA ו-HotStart Taq DNA Polymerase להגברה כמותית.תחת מערכת המאגר האופטימלית, הרגישות של הערכה יכולה להיות עד 0.1 עמודים עבור יעדים בעלי ביטוי גבוה וגבוהה עד 1 עמודים עבור יעדים בעלי ביטוי בינוני.הערכה מתאימה להגברה וכימות של דגימות DNA.הוא מאפשר זיהוי וכימות רגישים של חומצות גרעין מדגימות שונות של צמחים ובעלי חיים, תאים ומיקרואורגניזמים.
רכיבים
| No | שֵׁם | כרך | כרך |
| 1 | מאגר מתקדם | 250 μL | 2×1.25 מ"ל |
| 2 | מיקס אנזים מתקדם | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase ללא H2O | 250 μL | 2×1.25 מ"ל |
תנאי אחסון
יש לאחסן מוצר זה ב-25~-15℃ הרחק מאור למשך שנה.
הוראות
1. תצורת מערכת תגובהd
| רכיבים | נפח (μL) | נפח (μL) | ריכוז סופי |
| מאגר מתקדם | 12.5 | 25 | 1× |
| מיקס אנזים מתקדם | 1 | 2 | - |
| פריימר קדימה (10 מיקרומול/ליטר)a | 0.5 | 1 | 0.2 מיקרומול/ליטר |
| פריימר הפוך (10 מיקרומול/ליטר)a | 0.5 | 1 | 0.2 מיקרומול/ליטר |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase ללא H2Oc | עד 25 | עד 50 | - |
הערות:
1) א.טריכוז הפריימר הסופי היה 0.2 מיקרומול/ליטר, שניתן גם להתאים בין 0.1 ל-1 מיקרומול/ליטר בהתאם.
2) ב.המגיב רגיש ביותר, עם RNA Total בטווח של 1pg-1μg, ובדיקת דגימות אנושיות הראתה קלט אופטימלי של 1 pg-100 ng, השולטת על ערך Ct כולל בטווח של 15-30 בהתאם.
3) ג.מומלץ להשתמש ב-20μL או 50μL כדי להבטיח את התוקף והשחזור של הגברה של גן המטרה.
4) ד.נא להתכונן בספסל הנקי במיוחד ולהשתמש בקצות ובצינורות תגובה ללא שאריות נוקלאז;מומלץ לעצות עם מחסניות מסנן.הימנע מזיהום צולב וזיהום אירוסול.
2.תוכנית תגובה
| שלב מחזור | טמפ' | זְמַן | מחזורים |
| תמלול הפוך | 50℃a | 6 דקות | 1 |
| דנטורציה ראשונית | 95℃ | 5 דקות | 1 |
| תגובת הגברה | 95℃ | 15 שניות | 40 |
| 60℃b | 30 שניות | ||
| שלב עקומת התכה | ברירות מחדל של מכשיר | 1 | |
הערות:
1) א.ניתן לבחור את טמפרטורת השעתוק ההפוך בין 50-55 מעלות צלזיוס בהתאם לצרכי הניסוי.עבור דגימות DNA, ניתן להשמיט את תהליך השעתוק ההפוך.
2) ב.במקרים מיוחדים ניתן להתאים את טמפרטורת החישול/הארכה לפי ערך ה-primer Tm, מומלץ 60°C.
הערות
1. מוצר זה מיועד לשימוש מחקר בלבד.
2. נא לפעול עם מעילי מעבדה וכפפות חד פעמיות, למען ביטחונך.
