ערכת מיצוי DNA/RNA ויראלי
ערכה זו מתאימה למיצוי מהיר של DNA/RNA ויראלי בטוהר גבוה מדגימות כגון משטחי אף-לוע, משטחים סביבתיים, סופרנטנטים של תרבית תאים וסופר-נטנטים הומוגניים של רקמות.הערכה מבוססת על טכנולוגיית טיהור ממברנות סיליקה המייתרת את הצורך בשימוש בממיסים אורגניים של פנול/כלורופורם או משקעי אלכוהול גוזלים זמן כדי לחלץ DNA/RNA ויראלי באיכות גבוהה.חומצות הגרעין המתקבלות ללא זיהומים ומוכנות לשימוש בניסויים במורד הזרם כגון שעתוק הפוך, PCR, RT-PCR, PCR בזמן אמת, רצף הדור הבא (NGS) ו-Northern blot.
תנאי אחסון
אחסן ב 15 ~ 25 ℃, והובל בטמפרטורת החדר
רכיבים
| רכיבים | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 מ"ל |
| Buffer RW | 120 מ"ל |
| ddH2 O ללא RNase | 6 מ"ל |
| עמודות RNA FastPure | 100 |
| צינורות איסוף (2 מ"ל) | 100 |
| צינורות איסוף ללא RNase (1 .5 מ"ל) | 100 |
מאגר VL:לספק סביבה לתמוגה וקשירה.
מאגר RW:הסר שאריות חלבונים וזיהומים אחרים.
ddH2O נטול RNase:שחרר DNA/RNA מהממברנה בעמודת הספין.
עמודות FastPure RNA:ספציפית לספוג DNA/RNA.
צינורות איסוף 2 מ"ל:איסוף תסנין.
צינורות איסוף ללא RNase 1.5 מ"ל:אסוף DNA/RNA.
יישומים
משטחי אף-לוע, מקלונים סביבתיים, סופרנטנטים של תרבית תאים וסופרנטנטים הומוגנים של רקמות.
מאטר בהכנה עצמיתials
קצות פיפטה ללא RNase, צינורות צנטריפוגות ללא RNase 1.5 מ"ל, צנטריפוגה, מערבל מערבולת ופיפטות.
תהליך ניסוי
בצע את כל השלבים הבאים בארון בטיחות ביולוגי.
1. הוסף 200 μl מהדגימה לצינור צנטריפוגה ללא RNase (השלמה עם PBS או 0.9% NaCl במקרה של דגימה לא מספקת), הוסף 500 μl של Buffer VL, ערבב היטב על ידי מערבולת במשך 15 - 30 שניות, וצנטריפוגה בקצרה כדי לאסוף את התערובת בתחתית הצינור.
2. מניחים עמודות RNA FastPure בשפופרות אוסף של 2 מ"ל.העבירו את התערובת משלב 1 לעמודות RNA FastPure, צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד (13,400 × גרם) למשך דקה אחת והשליך את התסנין.
3. הוסף 600 μl של Buffer RW לעמודות RNA FastPure, צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד (13,400 × גרם) למשך 30 שניות והשליך את התסנן.
4. חזור על שלב 3.
5. צנטריפו את העמודה הריקה ב-12,000 סל"ד (13,400 × גרם) למשך 2 דקות.
6. העבירו בזהירות את עמודות RNA FastPure לתוך צינורות אוסף חדשים ללא RNase 1.5 מ"ל (המסופקים בערכה), והוסיפו 30 - 50 μl של ddH2O ללא RNase למרכז הממברנה מבלי לגעת בעמודה.הניחו לעמוד בטמפרטורת החדר למשך דקה אחת וצנטריפוגה ב-12,000 סל"ד (13,400 × גרם) למשך דקה אחת.
7. הסר את עמודות ה- FastPure RNA.ניתן להשתמש ב-DNA/RNA ישירות למבחנים הבאים, או לאחסן ב-30-15 מעלות צלזיוס לתקופה קצרה או ב-85-65 מעלות צלזיוס לתקופה ארוכה יותר.
הערות
לשימוש מחקר בלבד.לא לשימוש בהליכי אבחון.
1. שווי דגימות לטמפרטורת החדר מראש.
2. וירוסים הם מאוד מדבקים.אנא ודא שכל אמצעי הזהירות הדרושים ננקטים לפני הניסוי.
3. הימנע מהקפאה והפשרה חוזרת של הדגימה, מכיוון שהדבר עלול להוביל לפירוק או להפחתת התפוקה של ה-DNA/RNA הנגיפי המופק.
4. ציוד שהוכן בעצמו כולל קצות פיפטות ללא RNase, צינורות צנטריפוגות ללא RNase ללא RNase, צנטריפוגה, מערבל מערבולת ופיפטות.
5. בעת השימוש בערכה, לבש מעיל מעבדה, כפפות לטקס חד פעמיות ומסכה חד פעמית והשתמש במוצרים מתכלים ללא RNase כדי למזער את הסיכון לזיהום RNase.
6. בצע את כל השלבים בטמפרטורת החדר אלא אם צוין אחרת.
מנגנון וזרימת עבודה
