UNG רגיש לטמפרטורה
UNG רגיש לטמפרטורה (TS-UNG) הוא ביטוי המתקבל על ידי ביטוי רקומביננטי ב-E. coli.האנזים מזרז את שחרור האורציל החופשי מ-DNA חד ודו-גדילי המכיל אורציל ואינו פעיל נגד RNA.בהשוואה לאנזים UNG המקובל ממקור הגן E. coli, לאנזים TS-UNG פעילות גבוהה יותר בטמפרטורות נמוכות (20℃~37℃) והוא רגיש לטמפרטורה ומושבת בקלות (50℃), תוך הימנעות מהשפלה של הגברה המכילה dUTP מוצרים בטמפרטורת החדר על ידי הפעילות השיורית שעלולה להישאר לאחר השבתת האנזים UNG הרגיל.לכן, אנזים TS-UNG לא רק מתאים לתגובה למניעת זיהום PCR, אלא גם תואם היטב עם תוכנית ההגברה של RT-PCR וניתן להשתמש בו בתגובת מניעת זיהום RT-PCR.
יישום מומלץ
הגברה למניעת זיהום
מצב אחסון
-20 מעלות צלזיוס לאחסון לטווח ארוך, יש לערבב היטב לפני השימוש, להימנע מהקפאה-הפשרה תכופה.
מאגר אחסון
20 מ"מ Tris-HCl (pH 7.5), 100 מ"מ NaCl, 0.1 מ"מ EDTA, 1 מ"מ DTT, מייצב, 50% גליצרול.
הגדרת יחידה
כמות האנזים הדרושה לפירוק של 1 מיקרוגרם של DNA חד-גדילי המכיל בסיסי dU בשעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס היא יחידת פעילות אחת (U).
בקרת איכות
1.טוהר אלקטרופורטי SDS-PAGE גדול מ-98%
2.פעילות השפלה, בקרת אצווה לאצווה, יציבות
3.ללא פעילות נוקלאז אקסוגנית, ללא אנדונוקלאז אקסוגני או זיהום אקסוגני.
הוראות
| רכיבים | נפח (μL) | ריכוז סופי |
| 10 × מאגר PCR (ללא dNTP, Mg²+חינם) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 מיקרומטר |
| dUTP (החלף dTTP) | - | 200-600 מיקרומטר |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 מ"מ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × פריימר מיקסא | 2 | 1× |
| תבנית | - | ＜1 מיקרוגרם/תגובה |
| ddH₂O | עד 50 | - |
הערה: א: אם נעשה שימוש עבור qPCR/qRT-PCR, יש להוסיף את הבדיקה הפלורסנטית למערכת התגובה.בדרך כלל, ריכוז פריימר סופי של 0.2 מיקרומטר יכול לתת תוצאות טובות;כאשר ביצועי התגובה גרועים, ניתן להתאים את ריכוז הפריימר בטווח של 0.2-1 מיקרומטר.בדרך כלל, ריכוז הבדיקה עובר אופטימיזציה בטווח של 0.1-0.3 מיקרומטר.ניתן לבצע ניסויי שיפוע ריכוז כדי למצוא את השילוב הטוב ביותר של פריימר ובדיקה.
הערות
1.טמפרטורת התגובה האופטימלית של האנזים TS-UNG נמוכה יחסית, וניתן לייעל אותו בטווח של 20℃~37℃, ניתן לייעל את מינון האנזים וזמן התגובה בטווח של 0.1~0.5 U, 5~ 10 דק;וניתן להשבית את האנזים בתהליך של שעתוק הפוך.
2.זה מתאים ל-PCR ו-RT-PCR למניעת זיהום.
3.הימנע מהקפאה-הפשרה תכופה, ואל תחשוף לתנודות טמפרטורה גדולות.
4.לגנים שונים שיש להגביר יש יעילות ניצול שונה של dUTP ורגישות לאנזים UNG, לכן, אם השימוש במערכת UNG מוביל לירידה ברגישות הזיהוי, יש להתאים את מערכת התגובה ולבצע אופטימיזציה, אם אתה זקוק לתמיכה טכנית, אנא צור קשר החברה שלנו.
