2×HiF Taq פלוס מאסטר מיקס
מספר חתול: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (עם צבע) הוא תמיסה מוכנה לשימוש 2×-מעורבבת מראש המכילה Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs ומאגר אופטימלי.שני נוגדנים חד שבטיים בטמפרטורת החדר המעכבים פעילות פולימראז ופעילות 3′→5′exonuclease מתווספים לתערובת המאסטר עבור Hot Start PCR קל וספציפי במיוחד.גורם ההארכה מתווסף למיקס המאסטר כדי לתת לאנזים יכולת הגברה ארוכה של מקטעים, אורך ההגברה יכול להיות עד 13 kb, לאנזים פעילות פולימראז של 5′→3′ ו-3′→5′ פעילות אקסונוקלאז, נאמנותו היא פי 83 מזו של פולימראז DNA של Taq, שהיא פי 9 מזו של פולימראז DNA רגיל.זה מתאים להגברה של תבניות מורכבות, תוצר ההגברה הוא קצה קהה.
ל-2×HIF Taq plus Master Mix (עם צבע) יש את היתרונות של מהיר וקל, רגישות גבוהה, ספציפיות חזקה, יציבות טובה וכו', מערכת התגובה צריכה רק להוסיף פריימרים ותבניות, וניתן להגביר אותה על ידי שני- פרוטוקול צעד, מפשט את שלבי הניסוי וחוסך זמן.מוצר זה מכיל צבעי מחוון אלקטרופורזה, וניתן להשתמש במוצרי PCR ישירות לאלקטרופורזה.בנוסף, המוצר מכיל גם חומר הגנה ספציפי, כך שתערובת המאסטר יכולה לשמור על פעילות יציבה לאחר הקפאה-הפשרה חוזרת.
תנאי אחסון
יש לאחסן מוצרים ב-25~-15℃ למשך שנה.
מפרטים
מפרט מוצר | מאסטר מיקס |
ריכוז | 2× |
התחלה חמה | Hot Start מובנה |
תליה | לְהַקְהוֹת |
מהירות תגובה | מָהִיר |
גודל (מוצר סופי) | עד 13kb |
תנאים להובלה | קרח יבש |
סוג המוצר | תערובות קדם PCR נאמנות גבוהה |
הוראות
1.מערכת תגובת PCR
רכיבים | נפח (μL) |
תבנית DNA | מַתְאִים |
פריימר קדימה (10 מיקרומול/ליטר) | 2.5 |
פריימר הפוך (10 מיקרומול/ליטר) | 2.5 |
2×HIF Taq פלוס מאסטר מיקס | 25 |
ddH2O | עד 50 |
2.שימוש מומלץ בתבניות שונות
סוג התבנית | הגברה של קטעים מ-1kb עד 10kb |
DNA גנומי | 50 נ"ג-200 נ"ג |
פלסמיד או DNA ויראלי | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2.5 μL (לא יעלה על 10% מנפח התגובה הסופי של PCR) |
3.פרוטוקול הגברה
1) פרוטוקול דו-שלבי (תבנית מורכבות)
שלב מחזור | טמפ' | זְמַן | מחזורים |
דנטורציה ראשונית | 98℃ | 3 דקות | 1 |
דנטורציה | 98℃ | 10 שניות | 30-35 |
סיומת | 68℃ | 30 שניות/ק"ב | |
הארכה סופית | 72℃ | 5 דקות | 1 |
2) פרוטוקול שלושה שלבים (פרוטוקול רגיל)
שלב מחזור | טמפ' | זְמַן | מחזורים |
דנטורציה ראשונית | 98℃ | 3 דקות | 1 |
דנטורציה | 98℃ | 10 שניות | 30-35 |
רִכּוּך | 60℃ | 20 שניות | |
סיומת | 72℃ | 30 שניות/ק"ב | |
הארכה סופית | 72℃ | 5 דקות | 1 |
3) פרוטוקול גרדיאנט חישול (תבנית מורכבות)
שלב מחזור | טֶמפֶּרָטוּרָה | זְמַן | מחזורים |
דנטורציה ראשונית | 98℃ | 3 דקות | 1 |
דנטורציה | 98℃ | 10 שניות | 15 (הפחתה של 1℃ לכל מחזור) |
חישול שיפוע | 70-55℃ | 20 שניות | |
סיומת | 72℃ | 30 שניות/ק"ב | |
דנטורציה | 98℃ | 10 שניות |
20 |
רִכּוּך | 55℃ | 20 שניות | |
סיומת | 72℃ | 30 שניות/ק"ב | |
הארכה סופית | 72℃ | 5 דקות | 1 |
תכונות תחת פרוטוקול הגברה שונה
פרוטוקוl | שני צעדים | שלושה שלבים | חישול שיפוע |
מפרט | מָהִיר | בינוני | לְהַאֵט |
ספֵּצִיפִיוּת | גָבוֹהַ | בינוני | גָבוֹהַ |
תפוקת PCR | בינוני | גָבוֹהַ | בינוני |
שיעור זיהוי | גָבוֹהַ | בינוני | גָבוֹהַ |
הערות
נא ללבוש את הציוד הנחוץ, מעיל מעבדה וכפפות, כדי להבטיח את בריאותך ובטיחותך!