2×PCR מאסטר מיקס (ללא צבע)
PCR Master Mix הוא מעין תמיסה רגילה של PCR מעורבת מראש המוכנה לשימוש, כולל Taq DNA Polymerase, dNTP mix MgCl2 ומאגר אופטימלי.במהלך התגובה, ניתן להוסיף רק את הפריימר והתבנית להגברה, מה שמפשט מאוד את שלבי הפעולה של הניסוי.מוצר זה מכיל מייצבים מצוינים וניתן לאחסן אותו למשך 3 חודשים בטמפרטורה של 4℃.למוצר ה-PCR יש בליטת 3'-dA וניתן לשבט אותו בקלות לתוך וקטור T.
תנאי אחסון
יש לאחסן את המוצר ב-25℃~ -15℃ למשך שנתיים.
מפרטים
| נאמנות (מול Taq) | 1× |
| התחלה חמה | No |
| תליה | 3′-A |
| פולימראז | Taq DNA Polymerase |
| פורמט תגובה | SuperMix או מאסטר מיקס |
| מהירות תגובה | תֶקֶן |
| סוג המוצר | PCR מאסטר מיקס (2×) |
הוראות
1.מערכת תגובה
| רכיבים | גודל (μL) |
| תבנית DNA | מַתְאִים |
| פריימר 1 (10 מיקרומול/ליטר) | 2 |
| פריימר 2 (10 מיקרומול/ליטר) | 2 |
| PCR מאסטר מיקס | 25 |
| ddH2O | עד 50 |
2.פרוטוקול הגברה
| מחזור שלבים | טמפרטורה (°C) | זְמַן | מחזורים |
| טרום דנטורציה | 94 ℃ | 5 דקות | 1 |
| דנטורציה | 94 ℃ | 30 שניות | 35 |
| רִכּוּך | 50-60 ℃ | 30 שניות | |
| סיומת | 72 ℃ | 30-60 שניות/ק"ב | |
| הרחבה סופית | 72 ℃ | 10 דקות | 1 |
הערות:
1) שימוש בתבנית: 50-200 ng DNA גנומי;0.1-10 ng DNA פלסמיד.
2) מג2+ריכוז: מוצר זה מכיל 3 מ"מ של MgCl2 המתאים לרוב תגובות PCR.
3) טמפרטורת חישול: נא לעיין בערך ה-Tm התיאורטי של פריימרים.ניתן להגדיר את טמפרטורת החישול ל-2-5 ℃ נמוכה מהערך התיאורטי של הפריימר.
4) זמן הארכה: לזיהוי מולקולרי, מומלץ 30 שניות/ק"ב.עבור שיבוט גנים, 60מומלץ שניות/kb.
הערות
1.למען בטיחותך ובריאותך, נא ללבוש מעילי מעבדה וכפפות חד פעמיות להפעלה.
2.לשימוש מחקר בלבד!
