RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
מוצר זה מכיל חיץ תגובה, תערובת אנזימים RT (Bst DNA פולימראז ותעתיק הפוך עמיד בחום), Protectants lyophilized ורכיבי צבע כרומוגניים.כדי להשתמש, פשוט השתמש ב-Buffer, אנזים התגובה והפריימר מעורבבים ומוסיפים לתבנית;הוספת מגן lyophilized יכול להיות ישר.הוא חובר למייבש והופכה, ורק הפריימרים והתבניות נוספו בעת השימוש.ערכה זו מספקת זיהוי חזותי מהיר וברור של הגברה, אשר תגובה שלילית מסומנת באדום ותגובה חיובית מסומנת על ידי שינוי לצהוב.
רְכִיב
| רְכִיב | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| מאגר הגברה בתיווך לולאה (עם צבע) | 0.96 מ"ל | 4.80 מ"ל × 2 | 9.60 מ"ל × 10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 μL | 2.70 מ"ל | 2.70 מ"ל × 10 |
| מגן ליאופיל | 0.96 מ"ל × 2 | 9.60 מ"ל × 2 | 9.60 מ"ל × 20 |
יישומים
להגברה איזותרמית של DNA או RNA.
תנאי אחסון
מועבר עם קרח יבש, מאוחסן ב -25 ~ -15 ℃.הימנעו מהקפאה-הפשרה תכופה, המוצר תקף ל-12 חודשים.
נוהל
1.הפשר את חיץ התגובה לשימוש בטמפרטורת החדר.מערבלים קצרות או הפכו צינורות מספר פעמים כדי לערבב היטב, ואז צנטריפוגה כדי לאסוף את הנוזל לתחתית הצינור.
2.הכנת מערכת תגובה.ניתן להכין מגיב זה בשתי מערכות תגובה, תערובת תגובה נוזלית ותערובת מערכת ליופילית.
1) הכן תערובת תגובה נוזלית
| רְכִיב | כרך |
| מאגר הגברה בתיווך לולאה (עם צבע) | 10 μL |
| RT-Enzymes Mix | 2.8 μL |
| 10 × מיקס פריימרa | 5 μL |
| תבניות DNA/RNA b | × μL |
| מים ללא נוקלאז | עד 50 μL |
2) תערובת מערכת ליאופיליזציה
① הכן תערובת ליאופילית
| רְכִיב | כרך |
| מאגר הגברה בתיווך לולאה (עם צבע) | 10 μL |
| מגן ליאופיל | 20 μL |
| RT-Enzymes Mix | 2.8 μL |
| מים ללא נוקלאז | עד 50 μL |
② ליאופיליזציה: המיקס המוכן עבר ליופיליזציה במערכת של 50μL
③ הכן תערובת תגובה
| רְכִיב | כרך |
| תערובת ליאופיל | 1 חתיכה |
| 10 × מיקס פריימרa | 5 μL |
| תבניות DNA/RNA b | × μL |
| מים ללא נוקלאז | עד 50 μL |
הערות:
1) א.10×Primer Mix: 16 מיקרומטר FIP/BIP, 2 מיקרומטר F3/B3, 4 מיקרומטר לולאה F/B;
2) ב.DEPC (מסיס במים) מומלץ עבור חומצת גרעין.
1.דגירה ב-65 מעלות צלזיוס למשך 30-45 דקות, שניתן להאריך אותה כראוי בהתאם לזמן התגובה לשינוי הצבע.
2.לפי עין בלתי מזוינת, צהוב היה חיובי ואדום היה שלילי.
הערות
1.מלח עשוי להופיע בתחתית צינור החיץ, מערבולת קצרה או הפוך צינורות מספר פעמים כדי לערבב היטב בטמפרטורת החדר.
2.ניתן לבצע אופטימיזציה של טמפרטורת התגובה בין 62 ℃ ל 68 ℃ בהתאם למצב הפריימרים.
3.אין לחשוף את הריאגנטים הארוזים לאוויר במשך זמן רב.
4.תגובת שינוי הצבע האדום והצהוב תלויה בשינוי ה-pH של מערכת התגובה, נא לא להשתמש בתמיסת האחסון המכילה חומצת גרעין Tris, מומלץ להשתמש ב-ddH2O חומצת גרעין מאוחסנת;
5.הניסוי צריך להיות סטנדרטי, כולל הכנת מערכת התגובה, ליאופיליזציה ועיבוד דגימות ותהליך הוספת דגימות;
6.כדי למנוע זיהום, מומלץ להכין את מערכת התגובה בספסל נקי במיוחד, בשאר הוסף תבניות למנדף של החדר כדי למנוע הפרעות חיוביות שווא.
