רנס א
Ribonuclease A(RNaseA) הוא פוליפפטיד חד-גדילי המכיל 4 קשרי דיסולפיד במשקל מולקולרי של כ-13.7 kDa.RNase A הוא אנדוריבונוקלאז המפרק באופן ספציפי RNA חד-גדילי בשאריות C ו-U.באופן ספציפי, המחשוף מזהה את הקשר הפוספודיסטר הנוצר על ידי 5'-ריבוז של נוקלאוטיד וקבוצת הפוספט על 3'-ריבוז של נוקלאוטיד פירמידין הסמוך, כך שהפוספטים ה-2,3'-מחזוריים עוברים הידרוליזה ל-3 המקביל. פוספטים נוקלאוזידים (למשל, pG-pG-pC-pA-pG מבוקע על ידי RNase A כדי ליצור pG-pG-pCp ו-A-PG).RNase A הוא הפעיל ביותר בביקוע RNA חד-גדילי.ריכוז העבודה המומלץ הוא 1-100 מיקרוגרם G/mL, תואם למערכות תגובה שונות.ריכוז מלח נמוך (0-100 מ"מ NaCl) יכול לשמש לחיתוך RNA חד גדילי, RNA דו גדילי ושרשראות RNA הנוצרות על ידי הכלאה של RNA-DNA.
עם זאת, בריכוז מלח גבוה (≥0.3 M), RNase A מבקע באופן ספציפי רק RNA חד-גדילי.
RNase A משמש לרוב להסרת RNA במהלך הכנת DNA פלסמיד או DNA גנומי.אם DNase פעיל או לא במהלך תהליך ההכנה יכול בקלות להשפיע על התגובה.ניתן להשתמש בשיטה המסורתית של הרתחה באמבט מים כדי לבטל את פעילות ה-DNase.מוצר זה אינו מכיל DNase ופרוטאז, ואינו דורש טיפול בחום לפני השימוש.בנוסף, ניתן להשתמש במוצר זה גם בניסויים בביולוגיה מולקולרית כגון ניתוח הגנה על RNase וניתוח רצף RNA.
תנאי אחסון
יש לאחסן את המוצר ב-25℃~- 15℃ למשך שנתיים.
מפרטים
| מראה חיצוני | אֲבָקָה |
| כַּמוּת | 100 מ"ג / 1 גרם |
| סוג המוצר | RNase A |
הוראות
זוהי אחת השיטות הנפוצות להכנת פתרון אחסון RNase A.אפשר גם להכיןבשיטות אחרות לפי השיטות המסורתיות במעבדה או בספרות ההתייחסות (כגוןהמסה ישירה בתמיסת Tris-HCl 10 mM, pH 7.5 או Tris-NaCl)
1. השתמש ב-10 מ"מ נתרן אצטט (pH 5.2) כדי להכין 10 מ"ג/מ"ל של תמיסת אחסון RNase A.
2. חימום ב-100 ℃ למשך 15 דקות.
3. מצננים לטמפרטורת החדר, מוסיפים 1/10 נפח של 1 M Tris-HCl (pH 7.4), כוונן את ה-pH שלו ל-7.4 (עבורלדוגמה, הוסף 500 מ"ל של 10 מ"ג/מ"ל תמיסת אחסון RNase 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. ארוז משנה ב-20℃ לאחסון קפוא, שיכול להיות יציב עד שנתיים.
[הערות]:
כאשר מרתיחים תמיסת RNaseA בתנאים ניטרליים, ייווצרו משקעים של RNase;מרתיחים אותו ב-pH נמוך יותר, ואם יש משקעים, ניתן להבחין בהם, שעלולים להיגרם מנוכחות של זיהומי חלבון.אם נמצא משקעים לאחר רתיחה, ניתן להסיר זיהומים בצנטריפוגה במהירות גבוהה (13000 סל"ד), ולאחר מכן לארוז משנה לאחסון בהקפאה.
הערות
נא ללבוש את הציוד הנחוץ, כגון מעיל מעבדה וכפפות, כדי להבטיח את בריאותך ובטיחותך.
