Multiplex qPCR Probe Premix
מספר חתול: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Based Dye) הוא פתרון מראש להגברת PCR כמותית 2× בזמן אמת המאופיינת ברגישות ובספציפיות גבוהות, שצבען כחול, ויש לו השפעה של הוספת דגימה.מוצר זה הוא מגיב 2× Mix מעורב מראש המאפשר עד ארבע תגובות PCR כמותיות ניאון בבאר תגובה אחת.מוצר זה מכיל את שיטת הנוגדנים המהונדסים גנטית להפעלה חמה של אנזים Taq, המשפרת מאוד את רגישות ההגברה והספציפיות.במקביל, מוצר זה עשה אופטימיזציה עמוקה של חיץ ריבוי התגובה, מה שיכול לשפר את יעילות ההגברה של התגובה ולקדם את ההגברה היעילה של תבניות בריכוז נמוך.מוצר זה יכול לשמש עבור גנוטיפ וניתוח כמותי מרובה.
מִפרָט
| התחלה חמה | התחלה חמה מובנית |
| שיטת זיהוי | זיהוי פריימר-probe |
| שיטת PCR | qPCR |
| פולימראז | Taq DNA פולימראז |
| סוג המדגם | DNA |
תנאי אחסון
המוצר נשלח עם קרח יבש וניתן לאחסן אותו ב-25~-15℃ למשך שנתיים.
הוראות
1. תגובהמערכת
| רכיבים | נפח (μL) | ריכוז סופי |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| תערובת פריימר (10 מיקרומול/ליטר) a | × | 0.1 - 0.5 מיקרומול/ליטר |
| תערובת בדיקה (10 מיקרומול/ליטר)b | × | 50 - 250 ננומול/ליטר |
| צבע התייחסות של רוקס | 0.5 | 1× |
| תבנית DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | עד 25 | - |
הערות:ערבבו היטב לפני השימוש כדי למנוע בועות מוגזמות מטלטול נמרץ.
א.ריכוז פריימר: Primer Mix מכיל זוגות מרובים של פריימרים, בדרך כלל כל פריימר בריכוז סופי של 0.2 מיקרומול/ליטר וניתן גם לכוונן בין 0.1 ל-0.5 מיקרומול/ליטר בהתאם.
ב.ריכוז בדיקה: Probe Mix מכיל מספר בדיקות עם אותות פלואורסצנטי שונים, וניתן להתאים את הריכוז של כל בדיקה בין 50 ל-250 ננומול/ליטר בהתאם למצב ספציפי.
1.התייחסות לצבע Rox: הוא משמש במכשיר הגברה PCR בזמן אמת כמו Applied Biosystems כדי לתקן את השגיאה של אות הקרינה שנוצר בין בארות;מוצר זה אינו מכיל התייחסות לצבע רוקס.Cas#10200 מומלץ במידת הצורך.
2.דילול תבנית: qPCR הוא רגיש ביותר, ומומלץ לדלל את התבנית לשימוש.אם התבנית היא פתרון מלאי cDNA, נפח התבנית לא יעלה על 1/10 מהנפח הכולל.
3.מערכת תגובה: 25μL, 30μL או 50 μL מומלצת כדי להבטיח את היעילות והחזרה של הגברה של גן המטרה.
4.הכנת המערכת: נא להתכונן בספסל הסופר נקי, ולהשתמש בטיפים ובצינורות התגובה ללא שאריות נוקלאז;מומלץ להשתמש בטיפים עם מחסניות סינון.הימנע מזיהום צולב וזיהום אירוסול.
2.תוכנית תגובה
| שלב מחזור | טמפ'. | זְמַן | מחזורים |
| דנטורציה ראשונית | 95 ℃ | 5 דקות | 1 |
| דנטורציה | 95 ℃ | 15 שניות | 45 |
| חישול/הרחבה | 60 ℃ | 30 שניות |
הערות:
1.חישול/הרחבה: ניתן להתאים את הטמפרטורה והזמן בהתאם לערך Tm של ה-primer המיועד.
2.רכישת אות הקרינה: זמן רכישת אות הקרינה הנדרש עבור מכשירי זיהוי שונים של qPCR שונה, נא להגדיר בהתאם למגבלת הזמן המינימלית.הזמן של מספר מכשירים נפוצים מוגדר כדלקמן:
20 שניות: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 שניות: Applied Biosystems 7300
32 שניות: Applied Biosystems 7500
הערות
נא ללבוש את הציוד הנחוץ, מעיל מעבדה וכפפות, כדי להבטיח את בריאותך ובטיחותך!
