DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
מספר חתול: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) הוא endodeoxyribonuclease שיכול לעכל DNA חד או כפול.הוא מזהה ומבקע קשרים של פוספודיסטר כדי לייצר מונו-דאוקסינוקלאוטידים או אוליגודאוקסינוקלאוטידים חד- או דו-גדילי עם קבוצות פוספט במסוף 5' והידרוקסיל במסוף 3'.הפעילות של DNase I תלויה ב-Ca2+והוא יכול להיות מופעל על ידי יוני מתכת דו ערכיים כגון Mn2+ו-Zn2+.5 מ"מ Ca2+מגן על האנזים מפני הידרוליזה.בנוכחות Mg2+, האנזים יכול לזהות ולבקע באופן אקראי כל אתר על כל גדיל של DNA.בנוכחות מ.נ2+, ניתן לזהות את הגדילים הכפולים של ה-DNA בו-זמנית ולבקע אותם כמעט באותו אתר ליצירת שברי DNA בקצה שטוח או שברי DNA קצה דביק עם 1-2 נוקלאוטידים בולטים.
רכיבים
| שֵׁם | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, ללא RNase | 20μL | 200μL | 1 מ"ל | 10 מ"ל |
| 10×DNase I Buffer | 1 מ"ל | 1 מ"ל | 5 × 1 מ"ל | 5 × 10 מ"ל |
תנאי אחסון
-25 ℃ ~ -15 ℃ לאחסון;הובלה תחת שקיות קרח.
הוראות
1. הכן את תמיסת התגובה בצינור ללא RNase לפי הפרופורציות המפורטות להלן:
| רְכִיב | כרך |
| RNA | X מיקרוגרם |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, ללא RNase (5U/μL) | 1 U לכל מיקרוגרם RNA① |
| ddH2O | עד 10μL |
הערה: ①חשב את נפח ה-DNase I שיש להוסיף על סמך כמות ה-RNA.
2. 37 ℃ למשך 15 דקות;
3. הוסף 0.5M EDTA לריכוז הסופי של 2.5mM~5mM, וחמם ב-65℃ למשך 10 דקות כדי לעצור את התגובה.ניתן להשתמש בדגימה ישירות לתגובה הבאה כגון שעתוק הפוךלְנַסוֹת.
הגדרת יחידה
יחידה אחת מוגדרת ככמות האנזים שתפרק לחלוטין 1 מיקרוגרם של pBR322DNA תוך 10 דקות ב-37℃.
בקרת איכות
RNase:5U של DNase I עם 1.6 מיקרוגרם MS2 RNA למשך 4 שעות בטמפרטורה של 37℃ לא מניב פירוק מכיווןנקבע על ידי אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז.
הערות
1. נא להכין 0.5MEDTA לבד.
2. השתמש ב-1U DNase I לכל מיקרוגרם של RNA.עם זאת, אם ה-RNA קטן מ-1 מיקרוגרם, אנא השתמש ב-1U DNase I.
3. אנא הנח את האנזים על קרח במהלך הפעולה.
