Bst 2.0 DNA פולימראז (ללא גליצרול)
Bst DNA polymerase V2 נגזר מ-Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, בעל פעילות 5′→3′ DNA פולימראז ופעילות חזקה של החלפת שרשרת, אך אין פעילות 5′→3′ אקסונוקלאז.Bst DNA Polymerase V2 מתאים באופן אידיאלי לעקירת גדילים, LAMP הגברה איזותרמית (הגברה איזותרמית בתיווך לולאה) ורצף מהיר.
רכיבים
| רְכִיב | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (ללא גליצרול) (8U/μL) | 0.2 מ"ל | 1 מ"ל | 10 מ"ל |
| מאגר 10×HC Bst V2 | 1.5 מ"ל | 2×1.5 מ"ל | 3×10 מ"ל |
| MgSO4(100 מ"מ) | 1.5 מ"ל | 2×1.5 מ"ל | 2×10 מ"ל |
יישומים
1.LAMP הגברה איזותרמית
2. תגובת עקירה יחידה של גדיל DNA
3. רצף גנים גבוה GC
4. רצף DNA של רמת ננוגרם.
מצב אחסון
הובלה מתחת ל-0°C ולאחסן ב-25°C~-15°C.
הגדרת יחידה
יחידה אחת מוגדרת ככמות האנזים המשלבת 25 ננומול של dNTP בחומר בלתי מסיס בחומצה תוך 30 דקות ב-65 מעלות צלזיוס.
בקרת איכות
1.מבחן טוהר חלבון (SDS-PAGE):הטוהר של Bst DNA פולימראז V2 הוא ≥99% נקבע על ידי ניתוח SDS-PAGE באמצעות זיהוי Coomassie Blue.
2.פעילות Exonuclease:דגירה של תגובה של 50 μL המכילה מינימום של 8 U של Bst DNA פולימראז V2 עם 1 מיקרוגרם λ -Hind Ⅲ DNA עיכול למשך 16 שעות ב-37 ℃ לא גורמת לפירוק לא ניתן לזיהוי כפי שנקבע.
3.פעילות ניקאזה:דגירה של תגובה של 50 μL המכילה מינימום של 8 U של Bst DNA פולימראז V2 עם 1 מיקרוגרם pBR322 DNA במשך 16 שעות ב-37 מעלות צלזיוס לא גורמת לפירוק בלתי ניתן לזיהוי כפי שנקבע.
4.פעילות RNase:דגירה של תגובה של 50 μL המכילה מינימום של 8 U של Bst DNA פולימראז V2 עם 1.6 מיקרוגרם MS2 RNA למשך 16 שעות ב-37 מעלות צלזיוס לא גורמת לפירוק בלתי ניתן לזיהוי כפי שנקבע.
5.E. coli DNA:120 U של Bst DNA פולימראז V2 נבדק עבור נוכחות של DNA גנומי מסוג E. coli באמצעות TaqMan qPCR עם פריימרים ספציפיים ל-E. coli 16S rRNA לוקוס.זיהום ה-DNA הגנומי של E. coli הוא ≤1 עותק.
תגובת מנורה
| רכיבים | 25μL |
| מאגר 10×HC Bst V2 | 2.5 μL |
| MgSO4 (100 מ"מ) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM כל אחד) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 ירוק (25×)a | 1.0 μL |
| תערובת פריימרb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (ללא גליצרול) (8 U/uL) | 1 μL |
| תבנית | × μL |
| ddH₂O | עד 25 μL |
הערות:
1) א.SYTOTM 16 ירוק (25×): בהתאם לצרכים הניסויים, ניתן להשתמש בצבעים אחרים כתחליפים;
2) ב.תערובת פריימר: מתקבלת על ידי ערבוב של 20 מיקרומטר FIP, 20 מיקרומטר BIP, 2.5 מיקרומטר F3, 2.5 מיקרומטר B3, 5 מיקרומטר LF, 5 מיקרומטר LB ונפחים אחרים.
תגובה ומצב
1 × HC Bst V2 Buffer, טמפרטורת הדגירה היא בין 60°C ל-65°C.
השבתת חום
80 מעלות צלזיוס, 20 דקות
