התחלה חמה Bst 2.0 DNA Polymerase (ללא גליצרול)

Bst DNA polymerase V2 נגזר מ-Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, בעל פעילות 5′→3′ DNA פולימראז ופעילות חזקה של החלפת שרשרת, אך אין פעילות 5′→3′ אקסונוקלאז.Bst DNA Polymerase V2 מתאים באופן אידיאלי לעקירת גדילים, LAMP הגברה איזותרמית (הגברה איזותרמית בתיווך לולאה) ורצף מהיר.Bst DNA polymerase V2 היא גרסת התחלה חמה המבוססת על Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) המתקבלת על ידי טכנולוגיית שינוי הפיך, שיכולה לעכב פעילות DNA פולימראז בטמפרטורת החדר, כך שניתן להפעיל ולגבש את מערכת התגובה בטמפרטורת החדר למניעת אי הגברה ספציפית ושיפור יעילות התגובה, וגרסה זו ניתנת לליאופיליזציה.בנוסף, פעילותו משתחררת בטמפרטורות גבוהות, כך שאין צורך בשלב הפעלה נפרד.

רכיבים

Bst DNA פולימראז V2 (ללא גליצרול) (8U/μL)

יישומים

1.הגברה איזותרמית של LAMP

2.תגובת עקירה יחידה של גדיל DNA

3.רצף גנים גבוה של GC

4.רצף DNA של רמת ננוגרם.

מצב אחסון

הובלה מתחת ל-0°C ולאחסן ב-25°C~-15°C.

הגדרת יחידה

יחידה אחת מוגדרת ככמות האנזים המשלבת 25 ננומול של dNTP בחומר בלתי מסיס בחומצה תוך 30 דקות ב-65 מעלות צלזיוס.

בקרת איכות

1.מבחן טוהר חלבון (SDS-PAGE):הטוהר של Bst DNA פולימראז V2 הוא ≥99% נקבע על ידי ניתוח SDS-PAGE באמצעות זיהוי Coomassie Blue.

2.Endonucleaseפעילות:דגירה של תגובה של 50 μL המכילה מינימום של 8 U של Bst DNA פולימראז V2 עם 1 מיקרוגרם λDNA למשך 16 שעות ב-37 ℃ לא גורמת לפירוק לא ניתן לזיהוי כפי שנקבע.

3.פעילות Exonuclease:דגירה של תגובה של 50 μL המכילה מינימום של 8 U של Bst DNA פולימראז V2 עם 1 מיקרוגרם λ -Hind Ⅲ DNA עיכול למשך 16 שעות ב-37 ℃ לא גורמת לפירוק לא ניתן לזיהוי כפי שנקבע.

4.פעילות ניקאזה:דגירה של תגובה של 50 μL המכילה מינימום של 8 U של Bst DNA פולימראז V2 עם 1 מיקרוגרם pBR322 DNA במשך 16 שעות ב-37 מעלות צלזיוס לא גורמת לפירוק בלתי ניתן לזיהוי כפי שנקבע.

5.פעילות RNase:דגירה של תגובה של 50 μL המכילה מינימום של 8 U של Bst DNA פולימראז V2 עם 1.6 מיקרוגרם MS2 RNA למשך 16 שעות ב-37 מעלות צלזיוס לא גורמת לפירוק בלתי ניתן לזיהוי כפי שנקבע.

6.אי - קוליDNA:120 U של Bst DNA פולימראז V2 נבדק עבור נוכחות של DNA גנומי מסוג E. coli באמצעות TaqMan qPCR עם פריימרים ספציפיים ל-E. coli 16S rRNA לוקוס.זיהום ה-DNA הגנומי של E. coli הוא ≤1 עותק.

תגובת מנורה

הערות:

1) א.SYTOTM 16 ירוק (25×): בהתאם לצרכים הניסויים, ניתן להשתמש בצבעים אחרים כתחליפים;

2) ב.תערובת פריימר: מתקבלת על ידי ערבוב של 20 מיקרומטר FIP, 20 מיקרומטר BIP, 2.5 מיקרומטר F3, 2.5 מיקרומטר B3, 5 מיקרומטר LF, 5 מיקרומטר LB ונפחים אחרים.

תגובה ומצב

1 × HC Bst V2 Buffer, טמפרטורת הדגירה היא בין 60°C ל-65°C.

השבתת חום

 80 מעלות צלזיוס, 20 דקות