BspQI
BspQI יכול לבוא לידי ביטוי רקומביננטי ב-E. coli שיכול לזהות אתרים ספציפיים ומיוצרים תחת
BspQI, אנדונוקלאז הגבלת אנדונוקלאז של IIs, נגזר מזן E. coli רקומביננטי הנושא את הגן BspQI המשובט והמשתנה מ-Bacillus sphaericus.הוא יכול לזהות אתרים ספציפיים, ואתרי רצף הזיהוי ואתרי המחשוף הם כדלקמן:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
תכונות מוצר
1. פעילות גבוהה, עיכול מהיר;
2. פעילות כוכבים נמוכה, המבטיחה חיתוך מדויק כמו "אזמל";
3. ללא BSA וללא ממקור בעלי חיים;
רגישות למתילציה
Dאני מתילציה:לא רגיש;
Dס"מ מתילציה:לא רגיש;
CpG מתילציה:לא רגיש;
תנאי אחסון
יש לשלוח את המוצר ≤ 0℃;אחסן במצב -25~- 15℃.
מאגר אחסון
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500mM KCl, 1.0mM dithiothreitol, 500 µg/ml אלבומין רקומביננטי, 0. 1% Trition X-100 ו-50% גליצרול (pH 7.0 @ 25°C).
הגדרת יחידה
יחידה אחת מוגדרת ככמות האנזים הדרושה לעיכול 1 מיקרוגרם של DNA בקרה פנימית בשעה אחת ב- 50°C בנפח תגובה כולל של 50 μL.
בקרת איכות
מבחן טוהר חלבון (SDS-PAGE):הטוהר של BspQI היה ≥ 95% נקבע על ידי ניתוח SDS-PAGE.
RNase:10U של BspQI עם 1.6μg MS2 RNA למשך 4 שעות ב-50℃ אינו מניב שום פירוק כפי שנקבע על ידי אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז.
פעילות DNase לא ספציפית:10U של BspQI עם 1μg λ DNA ב-50℃ למשך 16 שעות, בהשוואה ל-50℃ למשך שעה, לא מניב עודף DNA כפי שנקבע על ידי אלקטרופורזה של ג'ל agarose.
קשירה וחיתוך:לאחר עיכול של 1 מיקרוגרם λDNA עם 10U BspQI, ניתן לקשור שברי DNA עם T4 DNA ligase ב-16ºC.וניתן לחתוך מחדש את השברים המקושרים האלה עם BspQI.
אי - קולי DNA: E. coli 16s rDNA ספציפי ל-TaqMan qPCR זיהוי הראה ששארית גנום E.coli ≤ 0.1pg/ul.
שאריות חלבון מארח:≤ 50 עמודים לדקה
חיידקי אנדוטוקסין: בדיקת LAL, על פי מהדורת פרמקופיה סינית IV 2020, שיטת בדיקת מגבלת ג'ל, כלל כללי (1143).תכולת האנדוטוקסין החיידקית צריכה להיות ≤10 EU/mg.
מערכת תגובה ותנאים
| רְכִיב | כרך |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 מיקרוגרם |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| dd H2O | עד 50 μL |
תנאי תגובה: 50℃, 1~16 שעות.
השבתת חום: 80 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
מערכת התגובה והתנאים המומלצים יכולים לספק אפקט עיכול אנזימים טוב יחסית, שהוא לעיון בלבד, אנא עיין בתוצאות הניסוי לפרטים.
יישום מוצר
הגבלת עיכול אנדונוקלאז, שיבוט מהיר.
הערות
1. נפח האנזים ≤ 1/10 מנפח התגובה.
2. פעילות כוכבים עלולה להתרחש כאשר ריכוז הגליצרול הוא יותר מ-5%.
3. פעילות מחשוף עלולה להתרחש כאשר מצע מתחת ליחס המומלץ.
