Ultra Nuclease
UltraNuclease הוא אנדונוקלאז מהונדסים גנטית שמקורו ב- Serratia marcescens, המסוגל לפרק DNA או RNA, כפול או חד גדילי, ליניארי או מעגלי במגוון רחב של מצבים, לפרק לחלוטין חומצות גרעין לאוליגונוקלאוטידים 5'-מונופוספטים עם 3 בסיסים. .לאחר שינוי הנדסה גנטית, המוצר הותסס, התבטא וטיהור ב-Escherichia coli (E. coli), מה שמפחית את הצמיגות של מחקר מדעי סופרנטנט תאים ו-lysate, אך גם משפר את יעילות הטיהור והמחקר התפקודי של חלבון.זה יכול לשמש גם בטיפול גנטי, טיהור וירוסים, ייצור חיסונים, תעשיית התרופות חלבון ופוליסכרידים כמגיב להסרת שאריות של חומצת גרעין מארח.
תכונות מוצר
| מס' CAS | 9025-65-4 |
| מספר EC | |
| משקל מולקולרי | 30kDa |
| נקודה איזואלקטרית | 6.85 |
| טוהר חלבון | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| פעילות ספציפית | ≥1.1×106U/mg |
| טמפרטורה אופטימלית | 37 מעלות צלזיוס |
| pH אופטימלי | 8.0 |
| ProteaseActivity | שלילי |
| עומס ביולוגי | ＜10CFU/100,000U |
| חלבון שיורי של תא מארח | ≤10ppm |
| מתכת כבדה | ≤10ppm |
| אנדוטוקסין חיידקי | ＜0.25EU/1000U |
| מאגר אחסון | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl ，50% גליצרול |
תנאי אחסון
≤0°C הובלה ；-25~-15°C אחסון ， תוקף של שנתיים (הימנע מהקפאה-הפשרה).
הגדרת יחידה
כמות האנזים ששימשה לשינוי ערך הספיגה של △A260 ב-1.0 תוך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס, pH 8.0, שווה ערך ל-DNA מעוכל של 37 מיקרוגרם של זרע סלמון על ידי חיתוך לאוליגונוקלאוטידים, הוגדרה כיחידה פעילה (U).
בקרת איכות
חלבון שיורי של תא מארח: ערכת ELISA
•פרוטאז שאריות: 250KU/mL UltraNuclease הגיב עם מצע למשך 60 דקות, לא זוהתה פעילות.
•אנדוטוקסין חיידקי: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volume 4 (מהדורת 2020) שיטת בדיקת ג'ל מגבלה.כללים כלליים (1143).
•עומס ביולוגי: פרמקופיה של הרפובליקה העממית של סין כרך 4 (מהדורת 2020) - כללי
כללים לבדיקת סטריליות (1101), תקן PRC National, GB 4789.2-2016.
•מתכת כבדה:ICP-AES, HJ776-2015.
מבצע
פעילות UltraNuclease עוכבה באופן משמעותי כאשר ריכוז SDS היה מעל 0.1% או EDTA
הריכוז היה מעל 1mM. לחומרי השטח Triton X-100, Tween 20 ו- Tween 80 לא הייתה השפעה על נוקלאז
מאפיינים כאשר הריכוז היה מתחת ל-1.5%.
| מבצע | תפעול אופטימלי | מבצע תקף |
| טֶמפֶּרָטוּרָה | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-11.0 |
| Mg2+ | 1-2 מ"מ | 1-15 מ"מ |
| DTT | 0-100 מ"מ | >100 מ"מ |
| 2-מרקפטואתנול | 0-100 מ"מ | >100 מ"מ |
| יון מתכת חד ערכי (Na+, K+ וכו') | 0-20 מ"מ | 0-200 מ"מ |
| PO43- | 0-10 מ"מ | 0-100 מ"מ |
שימוש ומינון
• הסר חומצת גרעין אקסוגנית ממוצרי החיסון, הפחית את הסיכון לרעילות שארית של חומצת גרעין ושפר את בטיחות המוצר.
• להפחית את הצמיגות של נוזל הזנה הנגרם על ידי חומצת גרעין, לקצר את זמן העיבוד ולהגדיל את תפוקת החלבון.
• הסר את חומצת הגרעין שעטפה את החלקיק (וירוס, גוף הכללה וכו'), דבר המסייע
לשחרור וטיהור החלקיק.
| סוג ניסוי | ייצור חלבון | וירוס, חיסון | תרופות תאים |
| מספר תאים | משקל תא רטוב של 1 גרם (מושה מחדש עם חיץ של 10 מ"ל) | 1 ליטר תסיסה סופרנטנט נוזלי | תרבות 1L |
| מינון מינימום | 250U | 100U | 100U |
| מינון מומלץ | 2500U | 25000U | 5000U |
• טיפול Nuclease יכול לשפר את הרזולוציה וההתאוששות של הדגימה עבור כרומטוגרפיה עמודה, אלקטרופורזה וניתוח סופג.
• בריפוי גנטי מסירים חומצת גרעין כדי להשיג וירוסים מטוהרים הקשורים לאדנו.
