DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) הוא endodeoxyribonuclease שיכול לעכל DNA חד או כפול.הוא מזהה ומבקע קשרי פוספודיסטר כדי לייצר מונו-דאוקסינוקלאוטידים או אוליגודאוקסינוקלאוטידים חד- או דו-גדילי עם קבוצות פוספט ב-5'-טרמינל והידרוקסיל ב-3'-טרמינל.הפעילות של DNase I תלויה ב- Ca2+ וניתן להפעיל אותה על ידי יוני מתכת דו ערכיים כמו Mn2+ ו-Zn2+.5mM Ca2+ מגן על האנזים מפני הידרוליזה.בנוכחות Mg2+, האנזים יכול לזהות ולבקע באופן אקראי כל אתר על כל גדיל של DNA.בנוכחות Mn2+, ניתן לזהות את הגדילים הכפולים של ה-DNA בו-זמנית ולבקע אותם כמעט באותו אתר ליצירת שברי DNA בקצה שטוח או שברי DNA קצה דביק עם 1-2 נוקלאוטידים בולטים.
נכס מוצר
Bovine Pancreas DNase I התבטא במערכת ביטוי שמרים ומטוהר.
Cמתנגדים
| רְכִיב | כרך | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, ללא RNase | 20μL | 200μL | 1 מ"ל | 10 מ"ל |
| 10×DNase I Buffer | 1 מ"ל | 1 מ"ל | 5×1 מ"ל | 5×10 מ"ל |
הובלה ואחסנה
1. יציבות אחסון: - 15℃~-25℃ לאחסון;
2. יציבות תחבורה: הובלה תחת שקיות קרח;
3. מסופק ב: 10 מ"מ Tris-HCl, 2 מ"מ CaCl2, 50% גליצרול, pH 7.6 ב-25℃.
הגדרת יחידה
יחידה אחת מוגדרת ככמות האנזים שתפרק לחלוטין 1 מיקרוגרם של pBR322 DNA תוך 10 דקות ב-37 מעלות צלזיוס.
בקרת איכות
RNase:5U של DNase I עם 1.6 מיקרוגרם MS2 RNA למשך 4 שעות בטמפרטורה של 37 ℃ לא מניב פירוק כפי שנקבע על ידי אלקטרופורזה של ג'ל agarose.
חיידקי אנדוטוקסין:בדיקת LAL, על פי מהדורת פרמקופיה סינית IV 2020, שיטת בדיקת מגבלת ג'ל, כלל כללי (1143).תכולת האנדוטוקסין החיידקית צריכה להיות ≤10 EU/mg.
הוראות לשימוש
1. הכן את תמיסת התגובה בצינור ללא RNase לפי הפרופורציות המפורטות להלן:
| רְכִיב | כרך |
| RNA | X מיקרוגרם |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, ללא RNase (5U/μL) | 1 U לכל מיקרוגרם RNA |
| ddH2O | עד 10 μL |
2.37 ℃ למשך 15 דקות;
3. הוסף את חיץ הסיום כדי לעצור את התגובה, וחמם ב-65 ℃ למשך 10 דקות כדי לבטל את DNase I. ניתן להשתמש בדגימה ישירות לניסוי התעתיק הבא.
הערות
1. השתמש ב-1U DNase I לכל מיקרוגרם של RNA, או 1U DNase I עבור פחות מ-1Ug של RNA.
יש להוסיף 2.EDTA לריכוז סופי של 5 מ"מ כדי להגן על RNA מפירוק במהלך השבתת האנזים.
